長時程活細胞成像系統Incucyte®因其簡便的實驗設置和分析流程、以及廣泛的應用方向，深受用戶喜愛。在體外細胞水平的實驗中發揮著重要作用。引用其數據的CNS正刊上論文數量眾多，目前使用到Incucyte®發表的CNS正刊總數已經達到約200篇，往期鏈接如下：
活細胞成像刷屏！一天兩篇CELL揭秘神經退行性疾病和腫瘤免疫新療法
一天三篇CNS，Incucyte® 開啟細胞研究新速度
一周3篇Nature：Incucyte® 上演科研帽子戲法！
最近的2024年10月，利用Incucyte® 發CNS正刊的數量又達到了新高度，兩天5篇NATURE!
他們又是如何應用Incucyte® 的呢？
免疫細胞和靶細胞共培養[1]
中毒性表皮壞死松解癥（TEN）是一種由常見藥物誘導的致命皮膚反應，已成為一個新興的公共衛生問題。TEN患者會因角質形成細胞死亡，而出現嚴重和突然的表皮脫離。通過蛋白質組學分析，發現TEN患者免疫細胞和角質形成細胞區室中I型和II型干擾素的顯著富集。Incucyte® 體外實驗發現，使用JAK抑制劑托法替尼（ tofacitinib）降低了角質形成細胞的細胞毒性。體內口服給藥改善了兩種不同的TEN小鼠模型的臨床和組織學疾病嚴重程度。
圖1. Incucyte® 測試：自體共培養模型中，活化的外周血單核細胞（PBMC）在5小時內有效殺死角質形成細胞，并且這種作用被托法替尼以劑量依賴性方式抑制。每隔兩個小時測試一次，對死亡的角質形成細胞進行統計。
Incucyte® 有多個板位，可以滿足多個實驗組的高通量測定。
細胞凋亡[2]
三陰性乳腺癌 （TNBC）因其高度侵襲性和高復發率而令人談虎色變，迫切需要開發更有效的治療方法。本文發現，AKT抑制劑與組蛋白甲基轉移酶EZH2抑制劑的藥物具有協同作用，并在體內多個TNBC模型中促進持續的腫瘤消退，明確了其藥理作用。Incucyte® 被用于體外檢測藥物對腫瘤細胞系的殺傷作用。
圖2. Incucyte® 測試結果：NucLight Rapid Red試劑 （Sartorius，4717）標記細胞，用Cytotox Green （Sartorius，4633）監測細胞毒性。每2小時采集一次圖像，持續5天。使用Incucyte®軟件通過量化overlay的NucLight-red和Cytotox-green雙陽性細胞數（即死亡的細胞數）除以 NucLight-red 陽性細胞的總數來確定細胞毒性細胞的百分比。
Incucyte®有完善的活細胞試劑，并提供相應的protocol，以及overlay分析等軟件功能。
劃痕實驗[3]
人類產前皮膚由先天免疫細胞（包括巨噬細胞）組成，但這些細胞是否僅在免疫方面發揮作用，還是在形態發生中具有其他功能，尚不清楚。本文匯編了一份全面的產前人類皮膚多組學參考圖譜，結合單細胞和空間轉錄組學數據，表征了皮膚的微解剖組織生態位。該圖譜揭示了非免疫細胞和免疫細胞之間的串擾是毛囊形成的基礎，與無疤痕傷口愈合有關，對皮膚血管生成至關重要。
圖3. Incucyte® 劃痕測試：成纖維細胞與巨噬細胞共培養可以增加傷口愈合。
Incucyte® 有專門的工具可以方便的創造一致的劃痕。
兩種細胞的競爭[4]
晚期尿路上皮癌（UC）是一種經常致命的疾病，具有顯著的遺傳異質性。化療會誘導數百個晚期亞克隆突變的爆發。通過基因組計算工具觀察到，形成染色體外DNA （ecDNA）的SV（復雜結構變異）具有頻繁的高拷貝數環狀擴增子特征，例如尿路上皮癌中的大多數 CCND1（G1/S-特異性周期蛋白-D1基因），并包含額外的DNA片段并導致治療耐藥性的進化。在競爭試驗中，在順鉑或載體對照存在下，共培養等數量的具有GFP標記的空載體和mCherry標記的CCDN1游離型ecDNA的UMUC1細胞（CCDN1 UMUC1），使用Incucyte®活細胞成像系統測量 mCherry/GFP熒光信號的比率來監測對化療的適應性。
圖4. 用Incucyte®監測4天的mCherry/GFP細胞比例示意圖（6個小時拍攝一次），以追蹤腫瘤細胞對化療的適應性
圖5. CCND31 UMUC1細胞與對照細胞的比率，化療藥物順鉑的處理組明顯高于對照，說明CCND31 UMUC1細胞對化療有更佳的適應性
Incucyte®有多個熒光通道可以對多種細胞進行追蹤。
這些文章看重了
Incucyte®什么優點呢？
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培養箱內可長達數周的連續觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過多操作對細胞的傷害和移動多個板位，分別獨立設置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養皿，通量高具有劃痕，腫瘤球，類器官，趨化，血管生成等多個分析拍攝模塊，并配套相應的耗材高效簡便的模塊化軟件設置和數據分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標多參數；捕捉細胞每個細節，使得結果更加準確大于100種優化過的活細胞專用熒光試劑、耗材及詳盡的Protocol實驗形式多樣化：定性，兩者結合，協同/競爭實驗，垂釣文章數大于16000篇，認可度高只要放好您的細胞，其他交給Incucyte®吧！祝愿大家都能用Incucyte®發好文章！
Incucyte®長時程活細成像系統應用文集
-參考文獻-
[1]Spatial proteomics identifies JAKi as treatment for a lethal skin disease | Nature
[2]AKT and EZH2 inhibitors kill TNBCs by hijacking mechanisms of involution | Nature
[3[A prenatal skin atlas reveals immune regulation of human skin morphogenesis | Nature
[4]The interplay of mutagenesis and ecDNA shapes urothelial cancer evolution | Nature
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