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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
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產品介紹
產品簡介
Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基礎上通過基因工程技術得到新逆轉錄酶，與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其熱穩定性大幅度提高，可耐受高達60℃的反應溫度，適合具有復雜二級結構的RNA模板的逆轉錄。同時，該酶增強了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全長cDNA的能力也有了提升，可擴增長達10 kb的cDNA。
產品信息
貨號 | 11300ES92 / 11300ES93 / 11300ES98 |
規格 | 10,000 U / 5×10,000 U/ 200,000 U |
單位定義 | 以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質所需要的酶量定義為1個活性單位（U）。 |
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 11300ES92 | 11300ES93 | 11300ES98 |
11300-A | Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 mL |
11300-B | 5×Hifair® V Buffer | 250 μL | 1.25 mL | 5 mL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期2年。
使用說明
第一鏈cDNA合成操作步驟
1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結構，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產量。）
組分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | to 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL or 1 μL or 1 μL |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng |
65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。短暫離心收集反應液后，加入下表中的逆轉錄反應液，并輕輕吹打混勻。
2. 逆轉錄反應體系配制（20 μL體系）
組分 | 使用量 |
上一步的反應液 | 13 μL |
5×Hifair® V Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
3. 逆轉錄程序設置
溫度 | 時間 |
25℃* | 5 min |
42℃** | 15~30 min |
85℃*** | 5 min |
*當使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
**逆轉錄溫度：推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復雜二級結構的模板，可將逆轉錄溫度提高至50~55℃。
***85℃加熱5 min，目的是使逆轉錄酶失活。
逆轉錄產物可立即用于后續PCR或qPCR反應，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。
該逆轉錄酶也適用于一步法RT-qPCR，推薦每25 μL反應體系，添加10-20 U逆轉錄酶，也可根據實際情況逐步增加逆轉錄酶用量。
注意事項
1. 請保持實驗區域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染。
2. 所有操作均應在冰上進行，防止RNA降解。
3. 為保證高效率逆轉錄，建議使用高質量的RNA樣本。
4. 本產品僅用作科研用途。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
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