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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 5T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 40618ES05 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
MycAwayTM Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 支原體qPCR檢測試劑盒（探針法） | 40618ES25 | 25 T | 3155 |
40618ES60 | 100 T | 10355 |
產品描述
MycAwayTM Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 作為精確支原體檢測試劑盒，可用于確定如細胞庫、病毒種子、臨床治療用途的細胞和生物制品中是否存在支原體污染。本試劑盒采用熒光探針qPCR法技術，定性檢測待測樣本中支原體DNA，可覆蓋100多種支原體DNA序列；具備高靈敏、高特異、高效率、安全高等優勢，嚴格按照EP2.6.7和JPXVII支原體檢測相關標準要求進行驗證。
本試劑盒包含內部質控（IC），可用來判斷待檢樣本中是否包含對擴增反應存在抑制的因素，從而達到防止假陰性結果的產生；內部質控（IC）也可在樣本提取階段加入，以評估提取效果。本試劑盒與支原體DNA提取純化試劑盒配套使用，高效提取樣本中的支原體DNA，檢測限可達到10 CFU/mL，最高靈敏度可達1 CFU/mL。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | |
40618ES25 (25 T) | 40618ES60 (100 T) | ||
40618-A | 4×MyqPCR Reaction Buffer | 250 μL | 1 mL |
40618-B | MyPrimer&Probe MIX | 25 μL | 100 μL |
40618-C | 內部質控（IC） | 25 μL | 100 μL |
40618-D | 陽性質控（PC） | 500 μL | 2 mL |
【注】：陽性質控（PC）濃度為1000copies/µL。
運輸儲存方法
干冰運輸。-20℃保存，有效期一年。
注意事項
1）使用本試劑前請仔細閱讀本說明書，實驗應規范操作，包括樣本處理、反應體系的配制及加樣。
2）加樣和配液步驟都盡量在冰上操作。
3）每個組分在使用前都應震蕩混勻，低速離心。
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5）本產品僅作科研用途。
適用機型
PRISM®7500Real-Time PCR System、QuantStudio™5（ABI）；CFX96（Bio-Rad）
實驗設計
一、待測樣本DNA提取
建議使用QIAGEN公司的QIAamp DNA Mini Kit提取樣本DNA。
二、qPCR反應體系的準備
1）根據所要檢測樣本的數量，計算所需反應孔數，一般做2個重復孔。
反應孔數=（1個陽性質控PC+1個無模板對照NTC+N個待測樣本）×2
2）根據表1反應體系，將所需試劑放冰上融化。
3）根據反應孔數計算所需要的qPCR Mix的量。
Mix=（反應孔數+2）*（10+1+1+8）（包含加樣損失）
表1 反應體系（以40 μL為例）
組分 | 單孔體積（μL） | 終濃度 |
4× MyqPCR Reaction Buffer （40618-A) | 10 | 1× |
待測樣本DNA/陽性質控 | 20 | |
MyPrimer&Probe MIX (40618-B) | 1 | 0.4 μM |
IC (40618-C) | 1/0* | |
超純水 | Up to 40 | |
Total | 40 |
【注】：1）為保證實驗的穩定性，40618-A、40618-B組分需儲存于-20℃。
2）為減少反復凍融次數和避免污染，建議初次使用時將40618-C、40618-D分裝儲存于-80℃。
3）qPCR Mix配制過程不加待測樣本DNA與陽性質控。
4）1/0代表NTC反應孔中是否添加IC，使用試劑盒時建議加上IC，可以更好的確認體系是否配置正確。若不加，結果判斷請參照結果分析提示。
三、加樣
1）充分震蕩混勻qPCR Mix，低速離心，將管蓋殘留液體收集至管底。
2）向每孔反應管中分裝20μL qPCR Mix。
3）向已分裝過qPCR Mix的反應管中加入樣品，示例如下：
表2 加樣示例
待測樣本DNA | 20 μL qPCR Mix+20 μL 待測樣本DNA |
NTC對照 | 20 μL qPCR Mix+20 μL DNA Elution Buffer （或者ddH2O） |
陽性質控（PC） | 20 μL qPCR Mix +20 μL 陽性質控 |
【注】：此時每個反應孔的體積為40μL
4）蓋上反應管蓋子或者貼上光學膜，為避免影響熒光信號讀取，請注意不要在管蓋或者膜上做標記，或者用刮板反復摩擦。
5）反應管短時低速離心，將管壁液體收集至管底；充分震蕩混勻后，再短時低速離心，將管蓋和管壁的殘留液體收集至底，如有氣泡，需將氣泡排盡。
qPCR程序參數設置
1、創建目的通道探針：
創建目的通道的FAM探針，選擇報告熒光基團為FAM，猝滅熒光基團為none；
創建IC 通道的VIC探針，選擇報告熒光基團為VIC，猝滅熒光基團為none；
選擇檢測參比熒光為ROX（可選擇，試劑盒中不含）。
2、標準擴增程序：
反應階段 | 溫度 | 時間 | 循環數 | |
1 | 預變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
2 | 擴增反應 | 95℃ | 15 sec | 45 |
62℃* | 30 sec |
【注】：* 熒光信號采集。
結果分析
1、PC、NTC結果判斷:
質控樣本 | FAM 信號 | VIC 信號 |
PC | Ct<40 ,且有明顯的擴增曲線。 | Ct<40 ,且有明顯的擴增曲線。 |
NTC | Ct≧40 ,或無明顯的起峰。 | Mix 中添加內參IC ，Ct<40 ,且有明顯的擴增曲線。 |
Ct≧40 ,或無明顯的起峰。 | Mix 未添加內參IC ，Ct≧40 ,或無明顯的起峰。 |
2、待測樣本檢測結果判定：
FAM 信號 | VIC 信號 | 結果判斷 |
Ct<40 ,且有明顯的擴增曲線 | Ct<40 ,且有明顯的擴增曲線 | 陽性 |
Ct≧40 ,或無明顯的起峰 | 有抑制 | |
Ct≧40 ,或無明顯的起峰 | Ct<40 ,且有明顯的擴增曲線 | 陰性 |
Ct≧40 ,或無明顯的起峰 | 有抑制 |
【注】：*VIC信號如果有抑制，需重測或對樣本進行合適處理消除抑制因子
HB220112
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