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植物蛋白提取試劑盒

產品信息

產品描述

本試劑盒在利用液氮充分磨碎植物組織的同時，采用在變性條件下的利用特殊的試劑對植物細胞釋放出來的蛋白進行提取，試劑A中含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，有效抑制蛋白酶活性，///大程度地保持所抽提蛋白質的完整性；而且可以實現植物細胞、組織或原生質體樣品總蛋白的提取。

Yeasen開發的本產品，每次可以根據樣本與裂解液的推薦體積，實現包括膜蛋白、核蛋白、胞質蛋白以及在植物組織中含有的稀有蛋白在內的全蛋白。分離得到的蛋白組份可應用于SDS-PAGE、Western Blot、免疫沉淀等。試劑盒的使用次數按照植物組織樣本提取的量來確定。

產品組分

運輸和保存方法

冰袋下運輸，建議A組分產品分裝保存在-20℃；B組分保存于-20℃，有效期1年。

操作說明

由于A組分溶解較慢，所以實驗前需要提前從冰箱中取出溶解待使用！取適量的A組分，按照B組分與A組分1：100的比例進行配置好裂解緩沖液。

1.植物細胞樣品蛋白提取

1）離心收集植物細胞，按照每5~10×10⁵細胞加入100-200μL的裂解緩沖液的比例。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸，在冰上裂解5-10 min。

2）充分裂解后，10000-14000 g離心5 min，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

2.對于植物原生質體樣品

1）把組織/剪切成細小的碎片，制備原生質體。(可選)質粒轉化原生質體，繼續培養16-48 h，并可以根據需要給予適當的實驗條件處理。

2）100-500g低速離心收集原生質體。

3）按照每5~10×10⁵原生質體加入100-200μL的裂解緩沖液。輕彈管底以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的原生質體沉淀。如果原生質體量較多，必需分裝成5~10×10⁵原生質體/管，然后再裂解。

3.對于植物組織樣品

1）取出-80℃低溫保存或者冷凍處理的新鮮植物組織/剪切成細小的碎片（新鮮組織可用液氮處理后再進行剪切）。

2）將植物碎片放入預冷消毒的研缽中，往研缽中小心加入液氮，然后利用研磨杵充分研磨植物碎片至粉末。

3）轉移粉末至干凈的離心管中，按照每100 mg植物組織加入500-1000μL的裂解緩沖液 (如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量)，加入裂解液后強烈vortex充分混勻，使其充分裂解；

4）裂解后，10000-14000g離心3-5min，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意事項

1. 使用液氮時，請注意戴上防凍手套，避免液氮凍傷。若研磨的組織量較多，可多次加入液氮，保持植物組織處于充分冷凍狀態時研磨。

2. 植物細胞壁的破碎程度會影響蛋白的抽提效果。盡量將植物組織充分研磨粉碎，以破碎細胞壁。促進細胞蛋白的釋放，同時盡量不要取植物的維管組織。

3．植物在裂解后，產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。

4. 可以采用我公司生產的蛋白質濃度定量試劑盒（20201ES）對提取樣品中的蛋白質進行定量。

5. 對于SDS-PAGE 電泳，可以采用我公司生產的8分鐘快速考馬斯藍染色液（20309ES） 對膠進行染色。

6 本試劑盒只能夠用于體外實驗，不能夠用于臨床、治療和動物體內實驗等。

HB200907