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產品介紹
Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free）
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free） | 13278ES60 | 100 T | 875.00 |
Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free） | 13278ES76 | 500 T | 3165.00 |
產品描述
本產品適用于多重PCR實驗。Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free）由多重PCR酶制劑與不含Mg2+的2×擴增緩沖液組成，在進行擴增反應時，可在反應體系中根據需求添加適量Mg2+。該產品的擴增具有高均一性、高特異性和高靈敏度的特點，可以對20對及以上引物體系進行特異、均一的擴增反應。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產品編號/規格 | |
13278ES60 (100T) | 13278ES76 (500T) | ||
13278-A | Hieff® Multiplex PCR Enzyme | 100 μL | 500 μL |
13278-B | 2×Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free) | 2×1.25 mL | 10×1.25 mL |
13278-C | MgCl2 (25 mM) | 1×600 μL | 3×1 mL |
【注】:13278-A組分避免反復凍融。
運輸與保存方式
冰袋運輸。-20℃儲存，有效期1年。
反應體系
組分 | 體積 (μL) | 終濃度 |
2×Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free) | 25 | 1× |
Hieff® Multiplex PCR Enzyme | 1 | - |
Primer mix | x | 0.1 μM-0.5 μM |
模板DNA | DNA總量：1 ng-200 ng | - |
MgCl2（25 mM） | y | 1-5 mM |
無菌超純水 | up to 50 | - |
【注】: 1）DNA量和引物濃度均為推薦起始投入量和濃度，可根據具體實驗情況進行調整，選擇適投入量和濃度；
2）引物濃度：建議每條引物的濃度在0.1 μM-0.5 μM參考范圍內進行調整；
3）Hieff® Multiplex PCR Buffer（Mg2+ free）中已經包含擴增所需要的dNTP、鹽離子等，但不包含Mg2+，需在反應體系中根據實驗需求添加適量Mg2+。
擴增程序
循環步驟 | 溫度（℃） | 時間 | 循環數 |
預變性 | 94 | 1 min | 1 |
變性 | 94 | 30 sec | 15-45 |
退火 | 50-60 | 60 sec | |
延伸 | 72 | 60 sec/kb | |
終延伸 | 72 | 10 min | 1 |
【注】: 1）在PCR儀上設置上表中的反應程序進行多重PCR反應（設置熱蓋溫度至105℃左右）
2）使用本產品獲得的擴增產物需添加Loading buffer后用于電泳檢測。
3）延伸時間以長擴增片段為準，可適當延長延伸時間，但要避免過長時間帶來的非特異性擴增。
實驗案例分享
以人基因組DNA為模板，使用10對引物進行多重PCR反應，分別擴增97 bp、139 bp、181 bp、212 bp、268 bp、331 bp、415 bp、507 bp、741 bp和1172 bp的目的片段。
擴增體系配制 | 擴增程序設置 | ||||||
組分 | 體積 | 終濃度 |
| 循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free) | 25 μL | 1× |
| 預變性 | 94℃ | 1 min | 1 |
Hieff® Multiplex PCR Enzyme | 1 μL | - |
| 變性 | 94℃ | 30 sec | 35 |
Primer mix | 10 μL | 0.1 μM-0.5 μM |
| 退火 | 60℃ | 60 sec | |
模板DNA（100 ng/μL） | 1 μL | 2 ng/μL |
| 延伸 | 72℃ | 60 sec | |
MgCl2（25 mM） | 5 μL | 2.5 mM |
| 終延伸 | 72℃ | 10 min | 1 |
無菌超純水 | to 50 μL | - |
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電泳檢測
2%瓊脂糖凝膠；130 V；電泳時間1 h。
實驗結果
Lane 1：100bp DNA marker
Lane 2-3：10重PCR產物
HB200512
