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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 30 mL |
---|---|---|---|
貨號 | 41202ES30 | 應用領域 | 生物產業 |
主要用途 | 在短時間內獲得大量形態完好的外泌體 |
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格(元) | *(元) |
Hieff™ Quick exosome isolation kit(for Serum/Plasma) 血清/血漿外泌體提取試劑盒 | 41202ES30 | 30 mL | 室溫 | 2155.00 | 1500.00 |
產品描述
Exosome(外泌體)是由活細胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡,具有典型的脂質雙分子層結構;存在于細胞培養上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中;Exosome攜帶有多種蛋白質、脂類、DNA和RNA等重要信息,不僅在細胞與細胞間的物質和信息傳遞中起重要作用,更有望成為多種疾病的早期診斷標志物。
血清/血漿外泌體提取試劑盒采用*的分離技術,可以快速從血清/血漿中獲得大量完整的外泌體顆粒,適用于下游的細胞共培養、電鏡分析、Western Blot、熒光定量(qPCR)和高通量測序等應用。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 |
41202-A | Exosome isolation solution( Serum/Plasma) | 41202ES30/30 mL |
運輸和保存方法
室溫運輸,本試劑盒可于室溫穩定保存24個月。
注意事項
1、使用前請將外泌體抽提試劑(41202-A)充分混勻。
2、產品只針對血清/血漿樣本,不適用其它體液或者是細胞培養上清中外泌體的抽提;如果需要進行細胞上清外泌體分離,
請選用細胞培養上清外泌體快速抽提試劑盒。
3、如果想要進一步純化外泌體,可以使用相應抗體包被的磁珠進行親和純化。
4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
操作方法
樣品預處理:
1、收集新鮮的樣品,置于冰上待用;若為凍存的樣品,可于冰箱取出后放于25℃水浴中解凍,待*融化后置于冰上待用。
2、取1 mL血清/血液樣品轉移至離心管中,4℃,3000×g離心10 min,棄沉淀,并將上清轉移至新的離心管中。
3、將轉移的上清,4℃,10,000×g離心20 min,棄沉淀,將上清液轉移至新的離心管中。
外泌體分離:
1、向預處理后的樣品中,加入4倍體積的1×PBS充分混勻。
Serum/Plasma+PBS | 41202-A試劑用量 |
200 μL+800 μL | 200 μL |
1.0 mL+4.0 mL | 1.0 mL |
2、在PBS稀釋后的樣品中,繼續加入相應量的41202-A試劑;蓋緊離心管蓋,渦旋振蕩1 min,放置于4℃冰箱靜置2 h。
3、取出裝有混合液的離心管,4℃,10,000×g離心60 min,棄上清(盡可能吸凈上清液),收集富含外泌體的沉淀。
4、吸取一定量體積的1×PBS溶液均勻吹打離心沉淀物,待其充分懸浮于PBS后,將懸液轉移至新的1.5 mL離心管中。
注:加入PBS的量,建議根據初始樣本的體積決定,初始樣本體積:1×PBS體積=2.5:1。
5、將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃,12,000×g離心2 min,棄沉淀,保留上清液,該上清液即富含外泌體顆粒的溶液。
注:此時如果依然可以看到明顯的沉淀,建議重復步驟4,重新進行洗滌和沉淀。
6、純化后的外泌體可于4℃保存3天,-80℃ 長期保存,建議對外泌體進行分裝后保存,避免反復凍融。
外泌體純化(可選):
鑒于血清/血漿中雜蛋白較多,如果后續需要進行細胞共培養或者高通量測序,建議進行進一步純化。可以使用密理博100kD的孔徑的超濾管于4℃以14,000×g離心10-30 min,內管中即為純化后的外泌體顆粒;除此之外,還可以使用抗體包被的磁珠進行親和純化。
外泌體除菌(可選):
獲得的外泌體后期需要與細胞共培養,可以使用0.22 μm的濾器進行過濾除菌。初次嘗試時,外泌體濃度在10-100 μg/mL內做梯度摸索,選擇一個較為合適的條件。
效果展示
NTA粒徑檢測:結果顯示通過Yeasen外泌體抽提獲得的外泌體分散性好,大小均一,峰形單一。 | |
|
樣品來源:血液 檢測儀器:ZetaView 上清用量:200μL |
表面標志物分析:通過Western Blot分析外泌體表面蛋白,可以很好的檢測到TSG101,CD63和MHCC的存在。 | |
樣品來源:血液 裂解方式:RIPA裂解液 樣品用量:200 μL | |
核酸分析:通過Agilent 4200分析,可以檢測到較為明顯的外泌體小RNA條帶,足以滿足下游高通量測序的需求。 | |
樣品來源:血液 檢測儀器:Agilent 4200 抽提方法:Trizol 樣品用量:0.6 mL |
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