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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業,制藥 |
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產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格 |
Hieff Canace High-Fidelity DNA Polymerase高保真酶 | 10135ES60 | 100 U | -20oC | 626.00 |
10135ES76 | 500 U | -20oC | 2356.00 | |
10135ES80 | 1000 U | -20oC | 4256.00 |
產品描述
Hieff Canace High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。該酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，經基因工程改造而成。其蛋白結構包含5’→3’聚合酶結構域和經過改造的3’→5’外切酶結構域。這種組合大幅度提升了酶的耐熱性，保真性。耐熱溫度達到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了*的延伸因子，擴增速度達到15 sec/kb。本產品配備了優化后的酶緩沖液，添加了PCR增強組分，使得該酶具有*的擴增效率和廣泛的模板適應性，非常適合復雜模板的擴增。擴增產物為平末端。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編碼/規格 | ||
10135ES60 （100 U） | 10135ES76 （500 U） | 10135ES80 （1000 U） | ||
10135-A | Hieff Canace High-Fidelity DNA Polymerase（2 U/μl） | 50 μl | 50 μl×5 | 50 μl×10 |
10135-B | 2×Canace buffer (with 3 mM MgCl2) | 1 ml×3 | 1 ml×15 | 1 ml×30 |
產品應用
基因克隆；復雜模板擴增或長片段擴增；高通量PCR。
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃, 30 min內，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位（U）。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：20 μl反應體系，10 U本品和1 μg λDNA -HindIII，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
核酸內切酶殘留檢測：20 μl反應體系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃溫育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測: 50 μl體系中，加入2 U本品，以無菌ddH2O為模板，擴增E.coil 16s rDNA 基因。30個循環后擴增產物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無擴增條帶。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20oC保存。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
推薦PCR反應體系（冰上配制）
組分 | 體積 | 終濃度 |
ddH2O | to 50 μl | - |
2×Canace buffer (with 3 mM MgCl2) | 25 μl | 1× |
DNA模板 | 適量 | |
Primer正向 (10 μM) | 2.5 μl | 0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2.5 μl | 0.5 μM |
Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μl) | 0.5 μl | 1 U/50 μl |
【注】：1) 試劑使用：使用前要充分融化混勻。
2) 聚合酶濃度：推薦使用1 U/50 μl。可以在0.5-2 U/50 μl之間進行優化，請勿超過2 U/50 μl。
3) 聚合酶添加：為了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建議將聚合酶在zui后一步加到反應體系中。
4) Mg2+終濃度：體系終濃度為1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。
5) 復雜模板：復雜模板和高GC模板的擴增，可在體系中加3 %的DMSO，另外也可按2%的濃度遞增優化。
6) 不同模板的推薦使用量（50 μl反應體系）：
模板種類 | 擴增片段1 kb-20 kb |
基因組DNA | 50 ng-200 ng |
質粒或病毒DNA | 1ng-20 ng |
cDNA | 1-5 μl (不超過PCR反應總體積的1/10) |
PCR擴增程序設置
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 98℃ | 0.5-3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 35 |
退火 | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 15-30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：1) 預變性溫度和時間：推薦使用98℃。預變性推薦時間：質粒DNA等簡單模板為30 sec；cDNA、基因組DNA等復雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。
2) 退火溫度和時間：推薦使用60℃。退火溫度過低會導致非特異性擴增。引物設計參考熒光定量引物標準。推薦退火時間設置為20 sec，可以在10-30 sec內調節。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。也可根據需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的zui適溫度和時間。
3) 延伸溫度和時間：推薦使用72℃。延伸時間推薦如下：質粒DNA等簡單模板為15 sec/kb；cDNA、基因組DNA等復雜模板為30 sec/kb，根據實際情況可延長至40 sec/kb。
4) 擴增產物：請將PCR擴增產物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴增產物。擴增產物為平末端，產物直接用于克隆，請使用平末端連接載體。
應用實例
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