| 廣州測迪生物科技有限公司
主營產品： 美國kernel試劑盒,德國拜發試劑盒,瑞士Prionics試劑盒,荷蘭賽迪試劑盒 |
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更新時間：2015-07-10 10:55:30瀏覽次數：765
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IBV M41 serotype HI antigen 傳染性支氣管炎HI抗原
荷蘭GD公司生產的禽傳染性支氣管炎血凝抑制試驗用抗原
荷蘭GD公司，華南地區總代理
廣州測迪生物
楊
用于雞傳染性支氣管炎病毒（M41株）滅活疫苗血清學效力檢驗及免疫監測。
用法與判定】
1 材料
1.1 96孔V型微量反應板、單道及多道微量移液器、吸頭、加樣容器、吸管、燒杯等。
1.2 HA緩沖液 將5.96g HEPES、8.19g氯化鈉、0.15g氯化鈣依次溶解于1000ml雙蒸水中，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調至pH值6.5，用0.2?m微孔濾器濾過，分裝，置2～8℃保存備用。
1.3 生理鹽水 取9g氯化鈉溶解于1000ml蒸餾水中，即成。
1.4 1%雞紅細胞懸液 采集公雞血液（加入阿氏液抗凝），加入生理鹽水，離心，洗滌5次，zui后用HA緩沖液將血球泥稀釋至1%（V/V）。
1.5 25%高嶺土懸液 取高嶺土25g，加水至100ml，再加入0.1mol/L鹽酸溶液 250ml，搖勻，靜置60分鐘，棄上清，用去離子水反復洗滌至中性，置37℃，直至水份*蒸發，用pH值7.2 PBS（0.01mol/L）配成25%懸液，置2～8℃保存備用。
1.6 抗原溶解 將凍存的抗原溶解后搖勻，待測HA。
2 操作術式
2.1 IB HI抗原HA試驗操作方法
2.1.1 在96孔微量板上，從第1孔至第12孔，用加液器每孔加入HA緩沖液25?l。
2.1.2 取25?l HI抗原，從第1孔起，依次作2倍系列稀釋至第12孔，混合，棄去25?l。
2.1.3 每孔加入25?l HA緩沖液。
2.1.4 每孔加入25?l 1%雞紅細胞懸液，每塊板上設稀釋液和紅細胞懸液對照孔。
2.1.5 將微量板置振蕩器上振蕩30秒，置2～8℃作用45分鐘，判定結果。
2.1.6 結果判定 將微量板傾斜45度。對照孔的紅細胞應*沉淀到孔底中心，呈淚珠樣流淌，HA陽性孔的紅細胞則均勻分布于孔底或呈鋸齒樣凝集。使紅細胞*凝集的zui大稀釋倍數為該抗原的HA效價。
2.2 IB HI工作抗原的配制 如果IB HI抗原凝集價測定結果為1:256（舉例），則4個HA單位為1:64（256÷4=64），這時可將HI抗原用HA緩沖液稀釋64倍，即成4 HA單位的工作抗原液。
2.3 IB HI試驗操作方法
2.3.1 待檢血清的處理 取0.1ml血清，加入0.3ml 25%高嶺土懸液，混勻，置37℃ 60分鐘，以6000r/min離心15分鐘，取上清，即為1:4稀釋的待檢血清。
2.3.2 HI試驗操作方法
2.3.2.1 在96孔微量板上，每行從第2孔開始，每孔加入25?l HA緩沖液，直至第12孔。
2.3.2.2 分別在第1、2、12孔中加入處理過的待檢血清25?l。
2.3.2.3 用加樣器從第2孔起作2倍系列稀釋，直至第10孔（血清稀釋倍數從第1孔的1:4、第2孔的1:8……至第10孔的1:2048），棄去25?l。
2.3.2.4 向第1～11孔中加入25?l 4 HA單位的抗原，在微量振蕩器上振蕩30秒，室溫下作用30分鐘。
2.3.2.5 每孔加入25?l紅細胞懸液，振蕩30秒，放2～8℃下反應30～45分鐘，判定結果。
2.3.3 判定 判定時將微量板傾斜45度。只有當抗原對照孔（第11孔）中紅細胞*凝集、血清對照孔（第12孔）中的紅細胞*沉淀時，當陰性血清HI抗體效價不高于1:8、陽性血清HI抗體效價與已知效價相比誤差不高于1個滴度時，試驗方為成立。若紅細胞沉淀呈淚珠樣流淌，判為HI陽性；若紅細胞在孔底均勻分布或呈鋸齒狀凝集，判為HI陰性。以*抑制紅細胞凝集的zui高血清稀釋倍數作為待檢血清的HI抗體效價
