植物RNA核酸免提取試劑盒(高產(chǎn)量)
試劑盒應(yīng)用
本試劑盒采用專門針對(duì)植物樣本特性的裂解液PD在10分鐘內(nèi)完成植物葉片、根、莖、花蕊、種子等的裂解、提取和純化。提取對(duì)象包括水稻、玉米、小麥、油菜等作物。裂解液PD具有高效性能,充分釋放植物中RNA,從而獲得最大產(chǎn)量RNA。整個(gè)提取無(wú)需使用蛋白酶K等酶類制劑。該配方中含有RNA保護(hù)劑,能夠抑制RNA降解、保護(hù)RNA完整,從而提高產(chǎn)量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文庫(kù)構(gòu)建等。
本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。
試劑盒組成
組分 | Col-R0201(50T) | 編號(hào) |
裂解液PD | 35 mL | Col-R0203A |
洗滌液WA | 25 mL | Col-R0203B |
洗滌液WB | 12 mL | Col-R0203C |
洗脫液P | 5 mL |
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RNA吸附柱 | 50套 | Col-R0203E |
備注:第一次使用前,在洗滌液WB中加入48mL無(wú)水乙醇,并標(biāo)記“√"和時(shí)間,避免重復(fù)加入。
保存條件
室溫保存一年。
自備材料
水浴鍋或金屬浴、無(wú)水乙醇、1.5mL無(wú)RNase離心管、β-巰基乙醇、DNase I(2U/μL,或貨號(hào)QR0102)
使用方法
1. 20-100mg新鮮植物樣本經(jīng)過(guò)液氮研磨后,加入700μL裂解液PD和14μLβ-巰基乙醇,渦旋30秒。
2. 55℃孵育1分鐘。
備注:淀粉含量高,例如馬鈴薯等直接進(jìn)行步驟3。
3. 12,000rpm離心1分鐘,吸取500μL上清液。
4. 加入250μL無(wú)水乙醇,上下顛倒混勻。
5. 全部加入RNA吸附柱中,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中廢液。
6. 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液WA,12,000rpm離心30秒,倒掉收集管中廢液。
7. 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液WB,12,000rpm離心30秒,倒掉收集管中廢液。
8. 重復(fù)步驟7一次。
9. 12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中廢液。
10. 將RNA吸附柱放入新1.5mL無(wú)RNase離心管,加入30-50μL 洗脫液P,室溫放置1分鐘。
11. 12,000rpm離心2分鐘,得到RNA溶液,-80℃保存。
注意事項(xiàng)
1. 務(wù)必在超凈臺(tái)中進(jìn)行操作,常換手套,防止RNA降解。
2. 盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取。
3. 使用無(wú)DNase無(wú)RNase的吸頭和離心管,防止RNA降解,常更換吸頭,防止交叉污染。
4. 為了提高洗脫效率,可提前將洗脫液P置于65℃水浴后再使用。
5. 根據(jù)后續(xù)試驗(yàn)需求,請(qǐng)使用DNase I(貨號(hào)QR0102)進(jìn)行基因組清除。
常見(jiàn)問(wèn)題解析
問(wèn)題 | 可能原因 | 推薦解決方案 |
RNA吸附柱 堵塞 | (1)上樣量太高 (2)加入RNA吸附柱的液體中有固體成分或沉淀物 | (1)減少上樣量。 (2)增加離心時(shí)間。 (3)切勿吸取到可見(jiàn)固體成分。 (4)再次離心。 |
RNA得率低 | (1)未離心下來(lái) (2)樣本量太大,裂解不充分 | (1)減少樣本量。 (2)重復(fù)洗脫步驟一次。 |
RNA降解 | (1)樣本不新鮮 (2)RNA酶污染 | (1)使用新鮮樣本。 (2)使用保存在樣品保存液中樣本。 (3)樣本保存在-80℃甚至液氮中,盡可能現(xiàn)取現(xiàn)用。 (4)常更換手套。 (5)常更換吸頭和離心管。 (6)使用無(wú)DNase無(wú)RNase的吸頭和離心管。 |