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取 0.1mg 抗體溶解于(50mM MES,pH 8.5,或者0.05MPBS,pH 8.5)于 2ml 離心管中,加入活化后的微球,快速混勻后,室溫孵育,3 小時(shí)。
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參考價(jià) | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn) |
更新時(shí)間:2021/12/14 22:43:15瀏覽次數(shù):1178
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量子點(diǎn)微球(羧基)偶聯(lián)方法
粒徑: 100nm-300nm
激發(fā)/發(fā)射:365/610nm
一般取 1mg 微球(10mg/ml) 標(biāo)記 0.1mg 抗體,不同項(xiàng)目可進(jìn)行兩邊濃度摸索優(yōu)化。
具體操作流程如下:
1.100ul 微球 + 900 ul 標(biāo)記緩沖液(50mM MES,pH 6.0,或者0.05MPBS,pH 6.0);
2.17000rpm,離心 20min,第一遍;
3.去掉上清,用 1000ul 標(biāo)記緩沖液重懸微球;
4.17000rpm,離心 20min,第二遍;
5.去掉上清,用 1000ul 標(biāo)記緩沖液重懸微球(離心后微球重懸可使用水浴超聲儀,建議功率 500-700W,超聲時(shí)長 2-5min,下同),備用。
各稱取 20mg NHS 和 EDC,用標(biāo)記緩沖液溶解,現(xiàn)用現(xiàn)配,即 20mg/ml NHS 和 EDC; 取 20ul NHS,加入到清洗后的微球中,快速混勻;
然后再取 5ul EDC 加入到微球中,快速混勻; 室溫孵育,20-30min。
Ⅲ. 清洗去除殘留 EDC將活化后的微球:
1.17000rpm,離心 20min,第一遍;
2.去掉上清,用 1000ul 標(biāo)記緩沖液重懸微球;
3.17000rpm,離心 20min,第二遍;
4.去掉上清,用 1000ul 標(biāo)記緩沖液重懸微球,備用。
取 0.1mg 抗體溶解于(50mM MES,pH 8.5,或者0.05MPBS,pH 8.5)于 2ml 離心管中,加入活化后的微球,快速混勻后,室溫孵育,3 小時(shí)。
Ⅴ. 封閉
配制 20mg/ml 的 BSA,即稱取 20mg BSA,用終濃度 100mM 乙醇胺溶液充分溶解,備用。
微球標(biāo)記抗體后,加入 100ul 上述封閉液(含 BSA),室溫孵育 1 小時(shí)。 Ⅵ. 去除未結(jié)合的抗體
此步驟目的是通過高速離心的方法去除游離的未結(jié)合微球的抗體;
具體流程如下:
1.17000rpm,離心 20min,第一遍;
2.去掉上清,用 1000ul 稀釋液(50mM PBS,pH 7.4 或 50mM Tris,pH 8.0)重懸微球;
3.17000rpm,離心 20min,第二遍;
4.去掉上清,用 1000ul 稀釋液重懸微球,即為抗體-微球標(biāo)記復(fù)合物,4℃放置備用, 如長期保存需加入終濃度為 0.2% BSA 和 0.02% NaN3 溶液。
1. 保存條件:本產(chǎn)品需要于 2-8℃保存,切勿冷凍;
2. 本產(chǎn)品在使用前確認(rèn)處于均勻的懸浮狀態(tài),有輕微結(jié)塊可以用超聲去除;
3. 本產(chǎn)品活化后建議立即進(jìn)行偶聯(lián)實(shí)驗(yàn),活化狀態(tài)不宜長時(shí)間保存;
4. 本產(chǎn)品僅供科研使用。
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