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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
產品介紹
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit
細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格 |
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒 | 40754ES60 | 100T | -20℃ | 780.00 |
產品描述
細胞衰老（Cell senescence）是細胞控制其生長潛能的保障機制，一般含義是復制衰老（Replicative senescence，RS），指正常細胞經過有限次數的分裂后，停止分裂，此時細胞雖然是存活的，但是細胞形態和生理代謝活性發生明顯變化的現象。體外衰老細胞研究常用的生物學特征包括：1）不可逆的生長停滯；2）與衰老相關的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作為溶酶體內的水解酶，通常在pH 4.0的條件下表現活性，但是衰老細胞內其在pH 6.0的條件下表現活性，且隨著傳代次數的增加，細胞群體中表現衰老相關的β-半乳糖苷酶的細胞數目逐漸增加。
本試劑盒正是基于SA β-gal活性變化的生物學特征而設計的，專門用于對衰老細胞或組織進行染色檢測的一種技術。本試劑盒以X-Gal為底物，通過細胞內SA β-gal在酸性條件下穩定表達，催化底物生成深藍色產物，從而在光學顯微鏡下觀察顏色變化以分析細胞的衰老狀況。
本試劑盒適用于人和各種動物體外培養細胞的衰老檢測。產品性能穩定，參數經優化，著色敏感，特異性高。僅對衰老細胞進行染色，不會染色衰老前的細胞（presenescent cells）、靜止期細胞（quiescent cells）、永生細胞（immortal cells）或腫瘤細胞。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 規格 | 保存 |
40754-A | 清洗液A（Washing Buffer A） | 100 ml | 4ºC或-20℃保存 |
40754-B | 固定液B（Fixative Solution B） | 100 ml | -20℃保存 |
40754-C | X-Gal溶液C（X-Gal Solution C） | 5 ml | -20℃避光保存 |
40754-D | 染色液D（Staining Solution D） | 1 ml | -20℃保存 |
40754-E | 染色液E（Staining Solution E） | 1 ml | -20℃保存 |
40754-F | 染色液F（Staining Solution F） | 100 ml | -20℃保存 |
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事項
- 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
- 本試劑盒固定液B存在一定的腐蝕性和毒性，操作時請注意小心防護。
- 染色液E剛剛溶解后會觀察到有沉淀，屬正?，F象，充分混勻或者漩渦震蕩可促使沉淀全部溶解，之后用于染色實驗。
- X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的細胞樣品可以在 4ºC冰箱保存，但也需避免光照。
- 細胞β-半乳糖苷酶活性強，孵育3 h即顯示陽性；細胞β-半乳糖苷酶活性弱，則需要孵育24 h。細胞染色zui長孵育時間為 24 h。細胞呈現藍色的部位即為衰老細胞特異性β-半乳糖苷酶活性部位。
- 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應依賴于特定的pH值，不能用于細胞培養的CO2培養箱中進行染色反應。因為CO2培養箱中較高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。
- 本試劑盒適合各種類型和規格的培養細胞：載玻片，載玻片培養皿，35 mm 培養皿和各種孔數的細胞培養板，只需按照一定的比例調整工作液用量即可（參考表2）。
使用方法
- 實驗前的準備工作：
- 染色工作液配制
實驗開始前，將試劑盒內各組分從冰箱內取出，置于室溫回溫15~20min。其中X-Gal溶液C置入冰槽里等待溶化。根據以下染色工作液配方表（表1），實驗體系類型，檢測樣本數，統一配制單次實驗需要的染色工作液總量?；靹蚝?，置入37ºC恒溫水槽里預熱，即為染色工作液。
表1 染色工作液配方表
染色液D | 10μl |
染色液E | 10μl |
染色液F | 930μl |
X-Gal溶液C | 50μl |
注意：配制染色工作液時需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，對于二者的判定：聚丙烯容器可高壓滅菌，而聚苯乙烯容器則不可高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會嚴重變形。但是染色過程可以在聚苯乙烯容器內進行，如細胞培養常用的6孔板。
2）不同體系染色工作液用量
本試劑盒適合各種類型和規格的培養細胞：載玻片，載玻片培養皿，35 mm 培養皿，和各種孔數的細胞培養板，可參考下表2 調整染色工作液用量：
細胞培養類型 | 建議處理液 用量 |
載玻片（組織切片） | 1 ml |
載玻片培養皿 | 1 ml |
35 mm 培養皿 | 1 ml |
96 孔培養板 | 0.1 ml |
48 孔培養板 | 0.2 ml |
24 孔培養板 | 0.25 ml |
12 孔培養板 | 0.5 ml |
6 孔培養板 | 1.0 ml |
25 m2培養瓶 | 3.0 ml |
注意：以上用量僅作為參考，對于染色工作液的實際用量以充分覆蓋住細胞和組織為準。根據以上用量，本試劑盒對于6孔板，足夠做100個樣本的檢測；對于24孔板，足夠做400個樣本的檢測；對于96孔板，足夠做1000個樣本的檢測。對于組織切片足夠做100個樣本檢測。但是組織切片的厚度，大小對染色液用量的要求明顯不同，必須做合理用量調整。
- 6孔細胞培養板染色（貼壁細胞）：
- 吸除細胞培養液，用1ml清洗液A洗滌1次，加入1ml 固定液B，覆蓋整個生長表面。室溫固定15min。
注意：對于其他類型的培養板，固定液用量參照此比例進行操作。
- 吸除固定液B，用1ml清洗液A洗滌細胞3次，每次3min。
- 吸除清洗液A，每孔加入1ml預熱的染色工作液，覆蓋整個生長表面。
- 37℃孵育3 h～16 h，或直到細胞呈現藍色，可以用封口膜或保鮮膜封住6孔板防止液體蒸發。
注意：37℃孵育不能在CO2培養箱中進行，因其內高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。
5） 普通光學顯微鏡下觀察和計數：表達SA β-gal的細胞為陽性細胞，呈現藍色。如不能及時觀察計數，可以去除染色工作液，加入2ml 清洗液A或PBS緩沖液，4℃可以保存數天，或者加入封片劑封片后，4℃可保存較長時間。
- 懸浮細胞染色：
- 離心收集細胞至1.5ml離心管內，用1ml清洗液A洗滌1次，加入1ml 固定液B，覆蓋整個生長表面。室溫固定15min。固定時可以在搖床上緩慢搖動，以避免細胞結成團塊。
- 離心，吸除細胞固定液，用1ml清洗液A洗滌細胞3次，每次3min。
- 離心，吸除清洗液A，每管加入0.5-1ml預熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見表1。
- 37℃孵育3 h～16 h，或直到細胞呈現藍色（注：避免液體蒸發）。
注意：37℃孵育不能在CO2培養箱中進行，因其內高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。
- 取部分染色好的細胞，滴加到載玻片上或6孔板內，普通光學顯微鏡下觀察和計數。如不能及時觀察計數，可以離心，去除染色工作液，加入1ml清洗液A或PBS緩沖液，4℃可以保存數天。也可取細胞用于涂片，加上封片劑封片后，4℃可保存較長時間。
- 組織切片染色：
- 對于石蠟切片先按照常規方法進行脫蠟或水化處理。對于冰凍切片直接按照以下步驟進行；
- 加入適當體積的固定液B，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15min。
- 用清洗液A浸泡洗滌組織3次，每次不少于5min；
- 吸除清洗液A，加入適當量的預熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見表1。
- 37℃孵育24H，可以用封口膜或保鮮膜封住防止蒸發，把整個切片浸泡在染色工作液中。
注意：37℃孵育不能在CO2培養箱中進行，因其內高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。
普通光學顯微鏡下觀察和計數。如不能及時觀察計數，加上封片劑封片后4℃可保存較長時間。
