單菌落質(zhì)粒篩選試劑盒
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PCR原理
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈,在DNA聚合酶的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,加入設(shè)計(jì)引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。
但是,DNA聚合酶在高溫時(shí)會(huì)失活,因此,每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶,不僅操作煩瑣,而且價(jià)格昂貴,制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展。
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大 taq酶[1]量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
PCR技術(shù)的基本原理類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;②模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;③引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基互補(bǔ)配對(duì)與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈,重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2~4分鐘,2~3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。
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暈苯/六苯并苯/冠/蔻/SForonene 特純,95% 191-07-1 RT
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1,4-二甲氧基苯/對(duì)二甲氧基苯/對(duì)苯二酚二甲醚/氫醌二甲醚/氫醌二甲基醚/二甲基對(duì)苯二酚/對(duì)苯二甲醚/對(duì)甲氧基苯/二甲氧基苯烯/DMB SFSF,99% 150-78-7 RT
聯(lián)苯/苯基苯/聯(lián)二苯/1,1’-聯(lián)苯/BiSFhenyl SFSF 92-52-4 RT
色標(biāo)
碘代苯/碘苯/Iodobenzene SFSF,97% 591-50-4 RT,避光
4-甲氧基偶氮苯/對(duì)苯偶氮苯甲醚/對(duì)甲氧基偶氮苯/4-Methoxyazobenzene BR,97% 2396-60-3 RT
1,3,5-三溴苯/均三溴苯/1,3,5,-三溴代苯/對(duì)稱三溴苯/1,3,5-Tribromobenzene BR,98% 626-39-1 RT,避光
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1,5-二羥基萘/1,5-萘二酚/萘-1,5-二酚/1,5-DihydroxynaSFhthalene BR,97% 83-56-7 RT,避光
硫酸鋅/皓礬/七水硫酸鋅/鋅礬/ZinSF sulfate heSFtahydrate AR,99.5% 7446-20-0 RT
4N
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基準(zhǔn)試劑
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