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技術文章

大尺度鑒定miRNA靶點新方法

點擊次數(shù):935 發(fā)布時間:2016-7-27

《自然—方法學》網(wǎng)絡版近日介紹了瑞士蘇黎世大學分子生命科學研究所邁克爾•恩加特納(Michael O Hengartner)研究組發(fā)明的一種大尺度鑒定miRNA靶點新方法。

在過去幾年中,隨著實驗和計算方法的發(fā)展和完善,miRNA靶點的鑒定和預測研究取得很大進展。然而,全面正確地鑒定miRNA的生物學相關靶點依然是個難點。恩加特納研究組發(fā)明了一種叫做“選擇性反應監(jiān)測”(selected reaction monitoring,SRM)的方法,該方法利用有針對性的質(zhì)譜技術實現(xiàn)了對miRNA-靶點互作的大尺度蛋白組學分析,進而對預測的靶點進行驗證。

恩加特納等人利用線蟲let-7突變體及其野生型為實驗材料。為了測定由于let-7突變體數(shù)量減少導致的蛋白含量的下降,恩加特納等人對感興趣的let-7突變體和野生型的蛋白提取物進行化學標記,之后對其進行SRM質(zhì)譜分析,獲得了可靠的目標蛋白的定量數(shù)據(jù)。該實驗使用了一套let-7可能的靶點基因及一套對照基因。結(jié)果發(fā)現(xiàn),161個蛋白中的29個蛋白的表達含量在突變體中發(fā)生變化,這可能是由于let-7基因和不同的靶點互作結(jié)果——該結(jié)果得到了獨立下游實驗包括遺傳互作、多聚核糖體分析和熒光素酶檢測的驗證。

SRM技術可以作為一個驗證工具來進一步探討對于靶點的理解;此外,SRM也可能用來精細描述目標蛋白質(zhì)組亞群,促進miRNA生物功能模型的研究。(科學網(wǎng) 任春曉/編譯)

相關方法:“選擇性反應監(jiān)測”技術

完成人:邁克爾•恩加特納研究組/呂迪•埃伯索爾德研究組

實驗室:瑞士蘇黎世大學分子生命科學研究所 蘇黎世理工學院分子系統(tǒng)生物學研究所 蘇黎世系統(tǒng)生理學和代謝疾病合作中心 瑞士弗雷德里希•*生物醫(yī)藥研究所 英國劍橋大學生物化學系 英國劍橋大學威康信托/英國格登癌癥研究所 蘇黎世大學理學院

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