国产一卡2卡三卡4卡麻豆_了解最新日韩草逼视频_h片在线播放一区_国产激情影视在线_好了av四色综合无码久久_欧美黑白双插OOR720P_日本精品中文字幕在线_秋霞午夜手机影院_亚洲国产一区二区3da毛片_欧美杂交深喉video中文字幕

上海士鋒生物科技有限公司

ELISA試劑盒,進(jìn)口,中檢所標(biāo)準(zhǔn)品,生物試劑,培養(yǎng)基,中間體

化工儀器網(wǎng)收藏該商鋪

13

聯(lián)系電話(huà)

13122441390

 QQ交談      小標(biāo) 您所在位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 重組體DNA分子的選擇與鑒定
產(chǎn)品搜索

請(qǐng)輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字:

環(huán)境類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

藥品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品

抗生素

試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)品

生物試劑

培養(yǎng)基

PCR相關(guān)產(chǎn)品

細(xì)胞相關(guān)試劑

Omega Biotek

金標(biāo)試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)菌株

抗體

檢測(cè)、檢驗(yàn)試劑

食品安全檢測(cè)試劑盒

聯(lián)系方式
地址:上海市寶山區(qū)錦樂(lè)路
郵編:200431
聯(lián)系人:王小姐
電話(huà):021-56640936
傳真:021-33250231
手機(jī):13122441390 15900755943
留言:發(fā)送留言
個(gè)性化:www.shifengsj.com
網(wǎng)址:www.shfeng-edu.com
商鋪:http://www.xldjsj.com/st236594/
技術(shù)文章

重組體DNA分子的選擇與鑒定

點(diǎn)擊次數(shù):2597 發(fā)布時(shí)間:2016-7-18

“選擇”(selection)和“篩選”(screening)的基本含義。

選擇,是指通過(guò)某種外來(lái)附加壓力(或因素)的辨別作用,呈現(xiàn)具有重組DNA分子的特定克隆類(lèi)型的一種方法。選擇所涉及的范圍較為廣泛,包括根據(jù)克隆載體提供的表型特征的簡(jiǎn)單選擇(simple selection),和根據(jù)突變的互補(bǔ)作用對(duì)克隆基因的直接選擇(direct selection)。

篩選則是指通過(guò)某種特定的方法,從被分析的細(xì)胞群體或基因文庫(kù)中,鑒定出真正具有所需要重組DNA分子的特定克隆的過(guò)程。

一.遺傳檢測(cè)法

(1)根據(jù)載體表型特征選擇重組體分子的直接選擇法

在基因工程中使用的所有的載體分子,都帶有一個(gè)可選擇遺傳標(biāo)記或表型特征。遺傳選擇法使我們能夠?qū)⒅亟M體的DNA分子同非重組體的親本載體分子區(qū)別開(kāi)來(lái)。

(i)抗藥性記號(hào)插入失活選擇法

pBR322質(zhì)粒具有編碼有四環(huán)素抗性基因(tetr)和氨芐青霉素抗性基因(ampr),只要將轉(zhuǎn)化的細(xì)胞培養(yǎng)在含有四環(huán)素或氨芐青霉素的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,便可以容易地檢測(cè)出獲得此種質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞(圖6-19)。

(ii)β-半乳糖苷酸顯色反應(yīng)選擇法

根據(jù)插入失活原理,將外源DNA插入到它的lacZ基因上所造成β-半乳糠苷酶失活效應(yīng),可以通過(guò)大腸桿菌轉(zhuǎn)化子菌落在Xgal-IPTG培養(yǎng)基中的顏色變化直接觀察出來(lái)。β-半乳糖苷酶會(huì)把乳糖水解成半乳糖和葡萄糖(圖6-20)。

(2)根據(jù)插入序列的表型特征選擇重組體分子的直接選擇法

這種選擇法依據(jù)的基本原理是,轉(zhuǎn)化進(jìn)來(lái)的外源DNA編碼的基因,能夠?qū)Υ竽c桿菌寄主菌株所具有的突變發(fā)生體內(nèi)抑制或互補(bǔ)效應(yīng),從而使被轉(zhuǎn)化的寄主細(xì)胞表現(xiàn)出外源基因編碼的表型特征。

二.物理檢測(cè)法

(1)凝膠電泳檢測(cè)法

質(zhì)粒DNA的電泳遷移率是與其分子量大小成比例的。因此,那些帶有外源DNA插入序列的分子量較大的重組體DNA,在凝膠中的遷移速度,就要比不具有外源DNA插入序列的分子量較小的質(zhì)粒DNA來(lái)得緩慢些根據(jù)這種差別,就可以容易地鑒定出哪些菌落是含有具外源NDA插入序列的分子量較大的重組質(zhì)粒。

(2)R-環(huán)檢測(cè)法

在臨近雙鏈DNA變性溫度下和高濃度(70%)的甲酰胺溶液中,即所謂的形成R-環(huán)的條件下,雙鏈的DNA-RNA分子要比雙鏈的DNA-DNA分子更為穩(wěn)定。因此,將RNA及DNA的混合物置于這種退火條件下,RNA便會(huì)同它的雙鏈DNA分子中的互補(bǔ)序列退火形成穩(wěn)定的DNA-RNA雜交分子,而使被取代的另一鏈處于單鏈狀態(tài)。這種由單鏈DNA分支和雙鏈DNA-RNA分支形成的“泡狀”體,叫做R-環(huán)結(jié)構(gòu)。R-環(huán)結(jié)構(gòu)一旦形成就十分穩(wěn)定,而且可以在電子顯微銳下觀察到(圖6-21)。所以,應(yīng)用R-環(huán)檢測(cè)法,可以鑒定出雙鏈DNA中存在的與特定RNA分子同源的區(qū)域。

三.菌落或噬菌斑雜交篩選法

將被篩選的大腸桿菌菌落,從其生長(zhǎng)的瓊脂平板中小心地轉(zhuǎn)移到鋪放在瓊脂平板表同的硝酸纖維素濾膜上,而后進(jìn)行適當(dāng)?shù)臏赜?。取出已?jīng)長(zhǎng)有菌落的硝酸纖維素濾膜,使用堿液處理,使 DNA變性。然后再用適當(dāng)?shù)霓k法處理濾膜以除去蛋白質(zhì),留下的便是同硝酸纖維素濾膜結(jié)合的變性DNA。變性DNA同硝酸纖維素濾膜有很強(qiáng)的親全力,這樣便形成了菌落的“DNA印跡”。在80℃下烘烤濾膜,以使DNA牢固地固定下來(lái)。將這些濾膜同放射性標(biāo)記的DNA或RNA探針雜交,并通過(guò)放射自顯影檢測(cè)雜交的結(jié)果。含有同探針互補(bǔ)的DNA的菌落,在X光底片上呈現(xiàn)黑色的斑點(diǎn)(圖6-22),通過(guò)同原培養(yǎng)基平板上菌落位置的對(duì)照,挑選出陽(yáng)性菌落,便是我們所需要的含有目的基因插入片段的重組體克隆。

四.免疫化學(xué)檢測(cè)法

直接的免疫化學(xué)檢測(cè)技術(shù),同菌落雜交技術(shù)在程度上是十分類(lèi)似的。它是用抗體鑒定那引起產(chǎn)生外源DNA編碼的抗原的菌落或噬菌斑。只要當(dāng)一個(gè)克隆的目的基因,能夠在大腸桿菌寄生細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)表達(dá),合成出外源的蛋白質(zhì),就可以采用免疫化學(xué)法檢測(cè)重組體克隆。

免疫化學(xué)檢測(cè)法可分為放射性抗體測(cè)定法(radioactive antibody test),和免疫沉淀測(cè)定法(immunoprecipitation test)。這些方法zui突出的優(yōu)點(diǎn)是,它們能夠檢測(cè)不為寄主提供任何可選擇的表型特征的克隆基因。

[ 打印 ] [ 返回頂部 ] [ 關(guān)閉

| 商鋪首頁(yè) | 公司檔案 | 產(chǎn)品展示 | 供應(yīng)信息 | 公司動(dòng)態(tài) | 詢(xún)價(jià)留言 | 聯(lián)系我們 | 會(huì)員管理 |
化工儀器網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作,未經(jīng)允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.xldjsj.com, All rights reserved.
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購(gòu)買(mǎi)風(fēng)險(xiǎn),建議您在購(gòu)買(mǎi)產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
二維碼 在線(xiàn)交流

掃一掃訪(fǎng)問(wèn)手機(jī)站
主站蜘蛛池模板: 陇西县| 中方县| 南昌县| 屯门区| 邓州市| 德昌县| 东至县| 刚察县| 什邡市| 古浪县| 沐川县| 株洲市| 黔东| 鄂托克旗| 隆昌县| 英山县| 买车| 肥乡县| 宁阳县| 全椒县| 乌什县| 卢氏县| 嵊州市| 桐梓县| 治县。| 天长市| 五华县| 郎溪县| 清河县| 连江县| 偏关县| 兰坪| 巴林右旗| 临武县| 登封市| 开原市| 晋宁县| 云南省| 泰州市| 西城区| 治县。|