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技術文章
DNA目的片段的回收方法
點擊次數：1047 發布時間：2016-6-30
一、原理
回收目的片段的方法很多，常用的有凍融法，低熔點瓊脂糖法，透析代法、電泳回收法、玻璃孔回收法等。本實驗采用電泳回收法。通過特別的 V 形電泳槽，將挖出的含有目的片段的凝膠置于 V 形槽前，接通電泳電源， DNA 即進入 V 形管中，回收 V 形管中溶液即可， V 形管較小，回收的 DNA 片段能保持較高的濃度。
二、實驗步驟
1. 大量酶切產物的電泳分離：瓊脂糖為 0.8 %，選用大型電泳槽及厚梳子，并載低電壓下電泳以提高分辨率。
2. 紫外燈下用刀片小心切出含 1000bpDNA 片段的凝膠。
3. 把凝膠片置于特制的 V 型槽平臺上，在 V 型槽中加入 0.5 × TBE 電泳緩沖液(使其剛好淹過膠面)，再在 V 型孔中加入 7MNH 4 Ac ，接通電源進行電泳。
4. 紫外燈下檢測凝膠塊是否含有 DNA ，判斷 DNA 是否全部進入 V 形管溶液中。
5. 當 DNA 進入 V 形管中，放掉電泳槽中的緩沖液，吸出 V 形管中的溶液。
6. 溶液加兩倍體積的*，混勻，置- 70 ℃ 兩小時或者- 20 ℃
7.1200rpm 離心 10 分鐘，沉淀用 70 %酒精洗一次，風干，加入 10ul 與 8ul TE 及 1ul 載樣緩沖液混合，電泳檢查并根據帶的亮度估算其濃度。
三、注意事項
挖含目的 DNA 的凝膠時，盡量減少周圍凝膠的帶入。