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技術(shù)文章

DNA目的片段的回收方法

點(diǎn)擊次數(shù):941 發(fā)布時(shí)間:2016-6-30

一、原理

回收目的片段的方法很多,常用的有凍融法,低熔點(diǎn)瓊脂糖法,透析代法、電泳回收法、玻璃孔回收法等。本實(shí)驗(yàn)采用電泳回收法。通過(guò)特別的 V 形電泳槽,將挖出的含有目的片段的凝膠置于 V 形槽前,接通電泳電源, DNA 即進(jìn)入 V 形管中,回收 V 形管中溶液即可, V 形管較小,回收的 DNA 片段能保持較高的濃度。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1. 大量酶切產(chǎn)物的電泳分離:瓊脂糖為 0.8 %,選用大型電泳槽及厚梳子,并載低電壓下電泳以提高分辨率。

2. 紫外燈下用刀片小心切出含 1000bpDNA 片段的凝膠。

3. 把凝膠片置于特制的 V 型槽平臺(tái)上,在 V 型槽中加入 0.5 × TBE 電泳緩沖液(使其剛好淹過(guò)膠面),再在 V 型孔中加入 7MNH 4 Ac ,接通電源進(jìn)行電泳。

4. 紫外燈下檢測(cè)凝膠塊是否含有 DNA ,判斷 DNA 是否全部進(jìn)入 V 形管溶液中。

5. 當(dāng) DNA 進(jìn)入 V 形管中,放掉電泳槽中的緩沖液,吸出 V 形管中的溶液。

6. 溶液加兩倍體積的*,混勻,置- 70 ℃ 兩小時(shí)或者- 20 ℃ 

7.1200rpm 離心 10 分鐘,沉淀用 70 %酒精洗一次,風(fēng)干,加入 10ul 與 8ul TE 及 1ul 載樣緩沖液混合,電泳檢查并根據(jù)帶的亮度估算其濃度。

三、注意事項(xiàng)

挖含目的 DNA 的凝膠時(shí),盡量減少周?chē)z的帶入。

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