国产一卡2卡三卡4卡麻豆_了解最新日韩草逼视频_h片在线播放一区_国产激情影视在线_好了av四色综合无码久久_欧美黑白双插OOR720P_日本精品中文字幕在线_秋霞午夜手机影院_亚洲国产一区二区3da毛片_欧美杂交深喉video中文字幕

上海士鋒生物科技有限公司

ELISA試劑盒,進口,中檢所標準品,生物試劑,培養基,中間體

化工儀器網收藏該商鋪

13

聯系電話

13122441390

 QQ交談      小標 您所在位置:首頁 > 技術文章 > DNA的限制性酶切及電泳分析實驗方法
產品搜索

請輸入產品關鍵字:

環境類標準物質

藥品行業標準品

抗生素

試劑盒

標準品

生物試劑

培養基

PCR相關產品

細胞相關試劑

Omega Biotek

金標試劑盒

標準菌株

抗體

檢測、檢驗試劑

食品安全檢測試劑盒

聯系方式
地址:上海市寶山區錦樂路
郵編:200431
聯系人:王小姐
電話:021-56640936
傳真:021-33250231
手機:13122441390 15900755943
留言:發送留言
個性化:www.shifengsj.com
網址:www.shfeng-edu.com
商鋪:http://www.xldjsj.com/st236594/
技術文章

DNA的限制性酶切及電泳分析實驗方法

點擊次數:3353 發布時間:2016-6-15

基本原理

限制性核酸內切酶是一類能識別雙鏈DNA中特定堿基順序的核酸水解酶(水解磷酸二酯鍵)。根據酶的識別切割特性、催化條件及是否具有修飾酶活性,可分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三大類。通常所指的DNA限制性核酸內切酶就是Ⅱ型酶。

主要試劑

重組質粒DNA 插入片段300bp

本實驗所用限制性核酸內切酶為EcoRⅠ,其識別順序為:

5′----G↓AATT C----3′

3′----C TTAA↑G----5′

磷酸二脂鍵斷裂 產生5′粘性末端。

操作步驟

1. 反應體系的建立:

⑴ 在一無菌1.5 ml eppendorf管中加入:

無菌雙蒸水 7 μl

10×酶切緩沖液 2 μl

質粒DNA(100 ng/μl) 10 μl

EcoRⅠ(5 U/μl) 1 μl

總體積為20μl

⑵ 輕輕混勻,12000 rpm離心5 sec。

2. 37 ℃水浴1 h。

3. 將Eppendorf管置65 ℃水浴中10 min,通過加熱使酶失活以終止反應。

4. 12000 rpm離心5 sec,將管蓋及管壁上的水離下。

5. 取10 μl消化產物,與2 μl 6×上樣緩沖液混勻,瓊脂糖凝膠電泳檢測消化效果,電泳條件:約100 V 30~60 min。

6 結果觀察。

操作注意事項:

1. 吸樣量一定要準確

2. 為了不使酶污染而導致浪費,zui后才加酶

3. 要求在冰上操作,并充分混勻,

4. 開啟Eppendorf管時,手不要接觸到管蓋內面,以防污染。

5. 樣品在37 ℃與65 ℃保溫時,將離心管蓋嚴,以防水進入管內造成實驗失敗。

限制性內切酶酶解中常見的問題和原因

1. DNA*沒有被限制性內切酶切割:①限制性內切酶失活;②DNA不純,含有SDS、有機溶劑、EDTA等;③非限制性內切酶*反應條件;④酶切位點被修飾;⑤DNA上不存在該酶的識別順序。

2. DNA切割不*:①限制性內切酶活性下降或稀釋不正確;②DNA不純或反應條件不佳;③酶切位點被修飾;④部分DNA溶液粘在管壁上;⑤酶切后DNA粘末端退火。

3. DNA片段數目多于理論值:①限制性內切酶星號活力;②存在第二種限制性內切酶污染;③樣品DNA中含有其它DNA。

[ 打印 ] [ 返回頂部 ] [ 關閉

| 商鋪首頁 | 公司檔案 | 產品展示 | 供應信息 | 公司動態 | 詢價留言 | 聯系我們 | 會員管理 |
化工儀器網 設計制作,未經允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.xldjsj.com, All rights reserved.
以上信息由企業自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責,化工儀器網對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。
二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機站
主站蜘蛛池模板: 丹棱县| 富源县| 德昌县| 荃湾区| 阳泉市| 循化| 永济市| 西平县| 五大连池市| 玉溪市| 托克逊县| 桃园市| 合阳县| 临洮县| 岑巩县| 宽城| 长子县| 鄂尔多斯市| 东乌珠穆沁旗| 双牌县| 澎湖县| 定安县| 潜江市| 濮阳市| 榆社县| 南阳市| 绥中县| 岐山县| 安龙县| 西吉县| 巍山| 嵩明县| 洛川县| 潼关县| 绥阳县| 长汀县| 阳东县| 通化市| 临猗县| 霍林郭勒市| 城固县|