国产一卡2卡三卡4卡麻豆_了解最新日韩草逼视频_h片在线播放一区_国产激情影视在线_好了av四色综合无码久久_欧美黑白双插OOR720P_日本精品中文字幕在线_秋霞午夜手机影院_亚洲国产一区二区3da毛片_欧美杂交深喉video中文字幕

上海士鋒生物科技有限公司

ELISA試劑盒,進口,中檢所標準品,生物試劑,培養基,中間體

化工儀器網收藏該商鋪

13

聯系電話

13122441390

 QQ交談      小標 您所在位置:首頁 > 技術文章 > DNA測序原理和方法
產品搜索

請輸入產品關鍵字:

環境類標準物質

藥品行業標準品

抗生素

試劑盒

標準品

生物試劑

培養基

PCR相關產品

細胞相關試劑

Omega Biotek

金標試劑盒

標準菌株

抗體

檢測、檢驗試劑

食品安全檢測試劑盒

聯系方式
地址:上海市寶山區錦樂路
郵編:200431
聯系人:王小姐
電話:021-56640936
傳真:021-33250231
手機:13122441390 15900755943
留言:發送留言
個性化:www.shifengsj.com
網址:www.shfeng-edu.com
商鋪:http://www.xldjsj.com/st236594/
技術文章

DNA測序原理和方法

點擊次數:1734 發布時間:2016-5-16

DNA序列測定分手工測序和自動測序,手工測序包括Sanger雙脫氧鏈終止法和Maxam-Gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今DNA序列分析的主流。美國PE ABI公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀,其中310型是臨床檢測實驗室中使用zui多的一種型號。本實驗介紹的是ABI PRISM 310型DNA測序儀的測序原理和操作規程。

【原理】 ABI PRISM 310型基因分析儀(即DNA測序儀),采用毛細管電泳技術取代傳統的聚丙烯酰胺平板電泳,應用該公司的四色熒光染料標記的ddNTP(標記終止物法),因此通過單引物PCR測序反應,生成的PCR產物則是相差1個堿基的3"末端為4種不同熒光染料的單鏈DNA混合物,使得四種熒光染料的測序PCR產物可在一根毛細管內電泳,從而避免了泳道間遷移率差異的影響,大大提高了測序的度。由于分子大小不同,在毛細管電泳中的遷移率也不同,當其通過毛細管讀數窗口段時,激光檢測器窗口中的CCD(charge-coupled device)攝影機檢測器就可對熒光分子逐個進行檢測,激發的熒光經光柵分光,以區分代表不同堿基信息的不同顏色的熒光,并在CCD攝影機上同步成像,分析軟件可自動將不同熒光轉變為DNA序列,從而達到DNA測序的目的。分析結果能以凝膠電泳圖譜、熒光吸收峰圖或堿基排列順序等多種形式輸出。

它是一臺能自動灌膠、自動進樣、自動數據收集分析等全自動電腦控制的測定dna片段的堿基順序或大小和定量的精密儀器。PE公司還提供凝膠高分子聚合物,包括DNA測序膠(POP 6)和GeneScan膠(POP 4)。這些凝膠顆粒孔徑均一,避免了配膠條件不一致對測序精度的影響。它主要由毛細管電泳裝置、Macintosh電腦、彩色打印機和電泳等附件組成。電腦中則包括資料收集,分析和儀器運行等軟件。它使用的CCD攝影機檢測器,使DNA測序縮短至2.5h,PCR片段大小分析和定量分析為10~40min。

由于該儀器具有DNA測序,PCR片段大小分析和定量分析等功能,因此可進行DNA測序、雜合子分析、單鏈構象多態性分析(SSCP)、微衛星序列分析、長片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析,臨床上可除進行常規DNA測序外,還可進行單核苷酸多態性(SNP)分析、基因突變檢測、HLA配型、法醫學上的親子和個體鑒定、微生物與病毒的分型與鑒定等。

【試劑與器材】

1.BigDye測序反應試劑盒 主要試劑是BigDye Mix,內含PE四色熒光標記的ddNTP和普通dNTP,AmpliTaq DNA polymerase FS,反應緩沖液等。

2.pGEM-3Zf (+) 雙鏈DNA對照模板 0.2g/L,試劑盒配套試劑。

3.M13(-21)引物 TGTAAAACGACGGCCAGT,3.2μmol/L,即3.2pmol/μl,試劑盒配套試劑。

4.DNA測序模板 可以是PCR產物、單鏈DNA和質粒DNA等。模板濃度應調整在PCR反應時取量1μl為宜。本實驗測定的質粒DNA,濃度為0.2g/L,即200ng/μl。

5.引物 需根據所要測定的DNA片段設計正向或反向引物,配制成3.2μmol/L,即3.2pmol/μl。如重組質粒中含通用引物序列也可用通用引物,如M13(-21)引物,T7引物等。

6.滅菌去離子水或三蒸水。

7.0.2ml或和0.5ml的PCR管 蓋體分離,PE公司產品。

8.3mol/L 醋酸鈉(pH5.2) 稱取40.8g NaAc·3H2O溶于70ml蒸餾水中,冰醋酸調pH至5.2,定容至100ml,高壓滅菌后分裝。

9.70%乙醇和無水乙醇。

10.NaAc/乙醇混合液 取37.5ml無水乙醇和2.5ml 3mol/L NaAc混勻,室溫可保存1年。

11.POP 6測序膠 ABI產品。

12.模板抑制試劑(TSR) ABI產品。

[ 打印 ] [ 返回頂部 ] [ 關閉

| 商鋪首頁 | 公司檔案 | 產品展示 | 供應信息 | 公司動態 | 詢價留言 | 聯系我們 | 會員管理 |
化工儀器網 設計制作,未經允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.xldjsj.com, All rights reserved.
以上信息由企業自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責,化工儀器網對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。
二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機站
主站蜘蛛池模板: 南溪县| 神木县| 西乡县| 乌拉特后旗| 贵南县| 马公市| 沾化县| 遂溪县| 上虞市| 永吉县| 阿图什市| 航空| 安吉县| 罗平县| 西吉县| 永济市| 昌邑市| 临湘市| 普格县| 柳江县| 满城县| 抚松县| 岢岚县| 石阡县| 当雄县| 抚松县| 南漳县| 顺义区| 通州区| 阜康市| 旺苍县| 龙岩市| 合阳县| 平谷区| 宁明县| 资中县| 沭阳县| 马鞍山市| 师宗县| 民勤县| 萝北县|