国产一卡2卡三卡4卡麻豆_了解最新日韩草逼视频_h片在线播放一区_国产激情影视在线_好了av四色综合无码久久_欧美黑白双插OOR720P_日本精品中文字幕在线_秋霞午夜手机影院_亚洲国产一区二区3da毛片_欧美杂交深喉video中文字幕

上海士鋒生物科技有限公司

ELISA試劑盒,進(jìn)口,中檢所標(biāo)準(zhǔn)品,生物試劑,培養(yǎng)基,中間體

化工儀器網(wǎng)收藏該商鋪

13

聯(lián)系電話

13122441390

 QQ交談      小標(biāo) 您所在位置:首頁 > 技術(shù)文章 > DNA測序原理和方法
產(chǎn)品搜索

請輸入產(chǎn)品關(guān)鍵字:

環(huán)境類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

藥品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品

抗生素

試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)品

生物試劑

培養(yǎng)基

PCR相關(guān)產(chǎn)品

細(xì)胞相關(guān)試劑

Omega Biotek

金標(biāo)試劑盒

標(biāo)準(zhǔn)菌株

抗體

檢測、檢驗(yàn)試劑

食品安全檢測試劑盒

聯(lián)系方式
地址:上海市寶山區(qū)錦樂路
郵編:200431
聯(lián)系人:王小姐
電話:021-56640936
傳真:021-33250231
手機(jī):13122441390 15900755943
留言:發(fā)送留言
個(gè)性化:www.shifengsj.com
網(wǎng)址:www.shfeng-edu.com
商鋪:http://www.xldjsj.com/st236594/
技術(shù)文章

DNA測序原理和方法

點(diǎn)擊次數(shù):1688 發(fā)布時(shí)間:2016-5-16

DNA序列測定分手工測序和自動(dòng)測序,手工測序包括Sanger雙脫氧鏈終止法和Maxam-Gilbert化學(xué)降解法。自動(dòng)化測序?qū)嶋H上已成為當(dāng)今DNA序列分析的主流。美國PE ABI公司已生產(chǎn)出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀,其中310型是臨床檢測實(shí)驗(yàn)室中使用zui多的一種型號。本實(shí)驗(yàn)介紹的是ABI PRISM 310型DNA測序儀的測序原理和操作規(guī)程。

【原理】 ABI PRISM 310型基因分析儀(即DNA測序儀),采用毛細(xì)管電泳技術(shù)取代傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺平板電泳,應(yīng)用該公司的四色熒光染料標(biāo)記的ddNTP(標(biāo)記終止物法),因此通過單引物PCR測序反應(yīng),生成的PCR產(chǎn)物則是相差1個(gè)堿基的3"末端為4種不同熒光染料的單鏈DNA混合物,使得四種熒光染料的測序PCR產(chǎn)物可在一根毛細(xì)管內(nèi)電泳,從而避免了泳道間遷移率差異的影響,大大提高了測序的度。由于分子大小不同,在毛細(xì)管電泳中的遷移率也不同,當(dāng)其通過毛細(xì)管讀數(shù)窗口段時(shí),激光檢測器窗口中的CCD(charge-coupled device)攝影機(jī)檢測器就可對熒光分子逐個(gè)進(jìn)行檢測,激發(fā)的熒光經(jīng)光柵分光,以區(qū)分代表不同堿基信息的不同顏色的熒光,并在CCD攝影機(jī)上同步成像,分析軟件可自動(dòng)將不同熒光轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA序列,從而達(dá)到DNA測序的目的。分析結(jié)果能以凝膠電泳圖譜、熒光吸收峰圖或堿基排列順序等多種形式輸出。

它是一臺能自動(dòng)灌膠、自動(dòng)進(jìn)樣、自動(dòng)數(shù)據(jù)收集分析等全自動(dòng)電腦控制的測定dna片段的堿基順序或大小和定量的精密儀器。PE公司還提供凝膠高分子聚合物,包括DNA測序膠(POP 6)和GeneScan膠(POP 4)。這些凝膠顆粒孔徑均一,避免了配膠條件不一致對測序精度的影響。它主要由毛細(xì)管電泳裝置、Macintosh電腦、彩色打印機(jī)和電泳等附件組成。電腦中則包括資料收集,分析和儀器運(yùn)行等軟件。它使用的CCD攝影機(jī)檢測器,使DNA測序縮短至2.5h,PCR片段大小分析和定量分析為10~40min。

由于該儀器具有DNA測序,PCR片段大小分析和定量分析等功能,因此可進(jìn)行DNA測序、雜合子分析、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSCP)、微衛(wèi)星序列分析、長片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析,臨床上可除進(jìn)行常規(guī)DNA測序外,還可進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析、基因突變檢測、HLA配型、法醫(yī)學(xué)上的親子和個(gè)體鑒定、微生物與病毒的分型與鑒定等。

【試劑與器材】

1.BigDye測序反應(yīng)試劑盒 主要試劑是BigDye Mix,內(nèi)含PE四色熒光標(biāo)記的ddNTP和普通dNTP,AmpliTaq DNA polymerase FS,反應(yīng)緩沖液等。

2.pGEM-3Zf (+) 雙鏈DNA對照模板 0.2g/L,試劑盒配套試劑。

3.M13(-21)引物 TGTAAAACGACGGCCAGT,3.2μmol/L,即3.2pmol/μl,試劑盒配套試劑。

4.DNA測序模板 可以是PCR產(chǎn)物、單鏈DNA和質(zhì)粒DNA等。模板濃度應(yīng)調(diào)整在PCR反應(yīng)時(shí)取量1μl為宜。本實(shí)驗(yàn)測定的質(zhì)粒DNA,濃度為0.2g/L,即200ng/μl。

5.引物 需根據(jù)所要測定的DNA片段設(shè)計(jì)正向或反向引物,配制成3.2μmol/L,即3.2pmol/μl。如重組質(zhì)粒中含通用引物序列也可用通用引物,如M13(-21)引物,T7引物等。

6.滅菌去離子水或三蒸水。

7.0.2ml或和0.5ml的PCR管 蓋體分離,PE公司產(chǎn)品。

8.3mol/L 醋酸鈉(pH5.2) 稱取40.8g NaAc·3H2O溶于70ml蒸餾水中,冰醋酸調(diào)pH至5.2,定容至100ml,高壓滅菌后分裝。

9.70%乙醇和無水乙醇。

10.NaAc/乙醇混合液 取37.5ml無水乙醇和2.5ml 3mol/L NaAc混勻,室溫可保存1年。

11.POP 6測序膠 ABI產(chǎn)品。

12.模板抑制試劑(TSR) ABI產(chǎn)品。

[ 打印 ] [ 返回頂部 ] [ 關(guān)閉

| 商鋪首頁 | 公司檔案 | 產(chǎn)品展示 | 供應(yīng)信息 | 公司動(dòng)態(tài) | 詢價(jià)留言 | 聯(lián)系我們 | 會(huì)員管理 |
化工儀器網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作,未經(jīng)允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.xldjsj.com, All rights reserved.
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機(jī)站
主站蜘蛛池模板: 乐平市| 沙河市| 灵台县| 平果县| 广汉市| 福清市| 和政县| 股票| 定陶县| 萨迦县| 东至县| 鄯善县| 河津市| 夹江县| 建平县| 赫章县| 收藏| 大安市| 长沙县| 巴中市| 武陟县| 西宁市| 黄龙县| 二手房| 乐清市| 长白| 奎屯市| 攀枝花市| 垣曲县| 丹凤县| 利津县| 瓦房店市| 延川县| 杂多县| 三都| 汨罗市| 石狮市| 南京市| 蓬莱市| 浦城县| 新乡市|