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細胞生理活動的實驗觀察
點擊次數：2849 發布時間：2017-2-6
【實驗目的】
通過制片與觀察加深理解細胞的運動、吞噬等生理活動。
【實驗用品】
一、材料和標本 雄性蟾蜍、小白鼠、l％雞血懸液、6％淀粉肉湯、草履蟲。
二、器材和儀器 光鏡、2ml注射器、載玻片、蓋玻片、解剖器材、滴管、移液管、試管、玻璃片、黑紙。
三、試劑 0.3％臺盼蘭、1％剛果紅。
【實驗內容】
一、細胞的吞噬活動
(一)原理
白細胞是機體防御系統中能游走的單位。它分為粒細胞系、單核細胞系、淋巴系三類。它們有許多生理功能，如游走性、變形運動、趨化性、吞噬異物等。在白細胞中，以粒細胞、單核細胞的吞噬活動較強，故稱此二類細胞為吞噬細胞。單核細胞由血液進入組織后逐漸演變成巨噬細胞。吞噬細胞主要靠吞噬來處理異物。吞噬細胞首先由于趨化作用而向異物游走，然后伸出偽足包圍異物，并發生內吞作用形成吞噬泡將異物吞入細胞，繼而溶酶體與吞噬泡融合消化異物。
(二)小白鼠腹腔巨噬細胞吞噬活動的觀察
l．實驗前二天，每天向小鼠腹腔注射6％淀粉肉湯O．5～1ml(含O．3％臺盼蘭，起標記作用)，以刺激腹腔產生較多的巨噬細胞(此步由教師在實驗前進行完畢)。
2．實驗時，每組取一只經上述處理的小鼠，腹腔注射1％雞血懸液0．5～1ml，注射后輕揉小鼠腹部以使紅細胞懸液分散均勻。
3．1小時后，用頸椎脫位法處死小鼠，迅速剖開小鼠腹壁，向腹腔注入O．5ml～1ml生理鹽水，用牙簽輕輕攪拌使生理鹽水與腹腔液混勻。
4．用注射器抽取腹腔液，滴片，然后蓋上蓋片。
5．鏡檢，高倍鏡下畫圖記錄所見結果。
二、暗視野觀察細胞的纖毛和鞭毛運動
(一)原理
暗視野照明法是一種不使照射被檢物體的光線直接進入物鏡的照明方法。常常用它來觀察沒有染色的活體細胞或膠體粒子。利用此照明法，在鏡檢時不能直接看到通過標本的照明光線，只有被檢物體反射或衍射的光線進入物鏡可以提高分辨率，在暗視野中可以看到明亮的被檢物體的存在和運動，但它們的內部結構卻看不清楚。
(二)自制遮光板變普通顯微鏡為“簡單的暗視野顯微鏡”。
步驟：
1．將顯微鏡聚光器調到zui高位，用低倍鏡調焦至清楚。
2．取下目鏡，從鏡筒中觀察并調節光圈的大小，使其與鏡筒中所見物鏡的視野相等。
3．放一塊透明玻璃于載物臺透光孔上，用尺子測量光圈孔徑。
4．按照圖6--1的形狀，用黑紙剪成與調節后光圈孔徑一樣大小的中央遮光板。
5．將中央遮光板放置在顯微鏡的濾光框上，即可進行標本的暗視野觀察。
注：如果使用高倍鏡觀察標本時，應按高倍鏡調焦的視野大小重新制作中央遮光板。
細胞生理活動的實驗觀察
圖6—1中央遮光板
a．光圈孔徑
b．濾光片直徑
(三)觀察蟾蜍上頜粘膜上皮細胞的纖毛運動
步驟：
1．用搗毀腦脊髓的方法處死蟾蜍。
2．腹部向上將蟾蜍固定在蠟盤上。
3．沿蟾蜍二側口角向后剪開約l厘米，將下頜翻轉固定在腹部。
4．在上頜中線距喉頭1厘米處放置臘屑，觀察臘屑向什么方向移動？記錄臘屑開始移動到消失的時間(見圖6--2蟾蜍口腔內面圖)。
5．然后，用眼科剪刀剪取咽頭前部的上頜粘膜約2×2cm2小塊，用牙簽挑取剪下的粘膜，將縱切面貼于載片上。
6．加一滴生理鹽水于載玻片標本上，加蓋玻片，鏡檢。
細胞生理活動的實驗觀察
圖6—2 蟾蜍口腔內面圖
結果：
1．在低倍鏡下觀察上頜粘膜細胞纖毛運動的現象。
2．換高倍鏡仔細觀察纖毛有規律的運動。
(四)暗視野觀察蟾蜍精子的鞭毛運動