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細(xì)胞和細(xì)胞內(nèi)含物的觀察
點(diǎn)擊次數(shù)：1404 發(fā)布時(shí)間：2016-11-21
細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有多種細(xì)胞器。有些細(xì)胞器如線粒體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體等普遍存在于各種細(xì)胞中，而另有些細(xì)胞器如葉綠體，只存在于植物細(xì)胞中。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的這些結(jié)構(gòu)，除葉綠體外，一般在光學(xué)顯微鏡下不易看見，必須經(jīng)過一定的固定染色方法處理后，才能看到大多數(shù)細(xì)胞器，或直接用相差顯微鏡觀察。
線粒體
線粒體是一種動(dòng)態(tài)的易變結(jié)構(gòu)。經(jīng)過處理在光學(xué)顯微鏡下呈現(xiàn)為顆粒狀、棒狀或彎曲細(xì)線。線粒體的形態(tài)和數(shù)量隨不同生物、不同組織及不同生理狀態(tài)而發(fā)生變化，例如肝細(xì)胞、胰細(xì)胞的線粒體通常呈線狀，成熟的卵細(xì)胞內(nèi)線粒體呈顆粒狀，腎細(xì)胞內(nèi)的線粒體呈棒狀。顯示線粒體的方法可以概括為以下幾種：
1．生活細(xì)胞的觀察。如將組織培養(yǎng)細(xì)胞或其他生活細(xì)胞，放在相差顯微鏡下，就可以看到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有線狀小體活動(dòng)，這就是線粒體。
細(xì)胞和細(xì)胞內(nèi)含物的觀察2．活細(xì)胞染色法。就是利用某些無毒或毒性較小的染料，顯示出細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)存在的真實(shí)性，而并不對(duì)細(xì)胞的活動(dòng)有影響，如Janus green B（詹納斯綠B），就是一種毒性較小的堿性染料。將其配制成一定濃度，對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可以看到被染成藍(lán)綠色的線狀或顆粒小體，這就是線粒體。還可看到其在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的活動(dòng)狀況。線粒體所以能顯示出藍(lán)綠色，是由于線粒體中具有細(xì)胞色素氧化酶系統(tǒng)，它是染料始終處于氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中的染料被還原呈無色。
3． 固定染色法（即*制片法）。用特殊的固定液染色處理動(dòng)物的組織或細(xì)胞后，可顯示出線粒體的形態(tài)。但所用材料必須新鮮，否則線粒體常因已經(jīng)破壞而顯示不出，線粒體的組成成分主要是脂蛋白，脂類又以磷脂為主，用于線粒體的固定液含有餓酸，重鉻酸鉀等。因?yàn)閮烧呔苁怪愇镔|(zhì)保存下來，故可顯示出線粒體的形態(tài)。用于顯示線粒體形態(tài)的固定、染色方法較多，常用的有Altmann染色法、Regand染色法及Chmpy-Kull染色法等，但欲顯示線粒體的細(xì)微結(jié)構(gòu)，則要用電鏡技術(shù)。
4．生化分離提取方法。在一定的低溫條件下，將組織細(xì)胞破碎制備成勻漿，用于線粒體組分及其在不同生理狀態(tài)的分離分析研究。
高爾基體
高爾基體顯示的方法，目前使用較多的是：
1．固定染色法。1889年Golgi用鍍銀的方法顯示出這種細(xì)胞器，目前仍應(yīng)用AgNO3或餓酸處理材料，將高爾基體顯示為棕黑色。這是由于AgNO3、餓酸在高爾基體的部位被還原之故，所以顯出高爾基體的形態(tài)及其在細(xì)胞內(nèi)的分布。常用的方法有DaFano硝酸鈷-硝酸銀鍍銀法，Aoyama鍍銀法及Romony Cajal鍍銀法等，而欲顯示其細(xì)胞結(jié)構(gòu)，就得使用電鏡技術(shù)。
2．活體染色法。將中性紅配制成一定的濃度，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行活體染色，以顯示高爾基體。但此種顯示高爾基體的方法，仍不如詹納斯綠顯示線粒體的方法更為廣泛。因?yàn)橹行约t只能染高爾基體的液泡部分，因此有一定的局限性。