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染色體銀染色法
點擊次數：2021 發布時間：2016-11-3
一、實驗目的
通過實驗，掌握染色體銀染方法。
二、實驗原理
銀染核仁成形區的方法，zui早是Goodpasture 和Bloom(1975)提出的Ag-As技術。應用這種技術使人類、哺乳動物、兩棲類、植物等的核仁形成區(NOR)特異性染為黑色。這種銀染色陽性的NOR稱為Ag-NOR。
銀染方法的原理可能是由于轉錄的rDNA部分有豐富的酸性蛋白，它們具有S－H鍵和S－S鍵，容易將Ag+還原為Ag的顆粒，從而在活性的核仁形成區鍍上銀，呈現為黑色的區域。本實驗將介紹染色體核仁形成區的銀染顯示法（Ag-NOR），并了解Ag-NOR的多態現象。
三、實驗材料
兩棲類或小白鼠骨髓細胞染色體制片不經染色留用的標本片。
四、實驗器具和藥品試劑
顯微鏡、冰箱、恒溫水浴鍋、溫度計、大培養皿、燒杯、吸管、滴瓶、切片架、切片盒、鑷子。
硝酸銀、明膠、甲酸、擦鏡紙。
五、實驗方法和步驟
(一) 把大培養皿放入水浴中，升溫至65～70℃，同時用燒杯預熱蒸餾水。
(二) 將標本片平放在預熱的培養皿墊枕上，用50％硝酸銀溶液與2％明膠溶液以2：1混勻后，立刻滴加到染色體制片上，復以蓋片（或擦鏡紙）。
(三) 待反應液由無色透明變黃，zui后變成棕褐色后（約2～4分鐘），立即取出載片，用預熱的蒸餾水*沖洗，晾干后鏡檢。染色適度的片子，染色體為金黃色，NORS為黑色。
注意事項：
(一) 用于Ag-NOR染色的染色體標本，是新鮮制備的，以一周以內的制片為好，同時片內要求有眾多的分裂相。
(二) 銀染用的兩種反應液新配，一時用不完可裝棕色瓶中，冰箱４℃保存，但不得超過10天。
(三) 配制和使用硝酸銀溶液時要格外小心，不要滴灑在地上、桌上及手上等處，氧化為黑色的污點極難除去。
(四) 在明膠中添加甲酸可促進反應過程（2克明膠＋99毫升蒸餾水＋1毫升甲酸）。