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技術(shù)文章
巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)
點(diǎn)擊次數(shù)：1425 發(fā)布時(shí)間：2016-9-26
1．實(shí)驗(yàn)前三天，向每只小鼠腹腔內(nèi)注入無(wú)菌硫羥乙酸肉湯1ml（勿注入腸內(nèi)）。
2．引頸殺死動(dòng)物，手提鼠尾將全鼠浸入70％酒精中3～5秒。
3．置動(dòng)物于解剖臺(tái)上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開(kāi)皮膚拉向兩側(cè)，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁。
4．再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中，同時(shí)從兩側(cè)用手指揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內(nèi)充分流動(dòng)。
5．用針頭輕輕挑起腹壁，使動(dòng)物體微傾向一側(cè)，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)。
6．小心拔出針頭，把液體注入離心管中，250g 4℃離心10分鐘，去上清，加10 ml Eagle培養(yǎng)基。
7．計(jì)數(shù)細(xì)胞，每只小鼠可產(chǎn)生20～30×105細(xì)胞，其中90％為巨噬細(xì)胞。
8．為獲取3×105個(gè)帖附細(xì)胞/平方厘米，需接種2.5×106/ml。
9．為純化培養(yǎng)細(xì)胞，去除其它白細(xì)胞，接種數(shù)小時(shí)后，去除培養(yǎng)液，用Eagle液沖洗1～2次后，再加新Eagle培養(yǎng)液置37℃ CO2溫箱中培養(yǎng)。