詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產品品質,價格實惠,多種規格供應,售后完善。
產品名稱 | Attractin蛋白抗體 |
英文名稱 | Attractin |
規格 | 0.2ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
第八因子相關抗原FⅧAg英文名稱:Mouse Factor Ⅷ-related Antigen, FⅧAg
丙酮酸激酶M2型同工酶M2-PK英文名稱:Mouse Pyruvate Kinase, M2-PK
催乳素PRL英文名稱:mouse prolactin, PRL
抵抗素Resistin英文名稱:Mouse Resistin
乙酰膽堿受體抗體AChRab英文名稱:Mouse acetylcholine receptor antibody, AChRab
骨鈣素/骨谷氨酸蛋白OT/BGP英文名稱:Mouse Osteocalcin/Bone gla protein, OT/BGP
γ氨基丁酸GABA英文名稱:Mouse Gamma-aminobutyric acid, GABA
5羥色胺5-HT英文名稱:Mouse 5-Hydroxytryptamine, 5HT
P物質受體SP-R英文名稱:Mouse substance P receptor, SP-R
P物質SP英文名稱:Mouse Substance P, SP
血管活性腸肽VIP英文名稱:Mouse Vasoactive Intestinal Peptide, VIP
甲狀腺過氧化物酶TPO英文名稱:Mouse Thyroid-Peroxidase, TPO
αL巖藻糖苷酶AFU英文名稱:Mouse alpha-L-fucosidase, AFU
血管舒緩激肽BK英文名稱:Mouse bradykinin, BK
胰島素原PI英文名稱:Mouse Proinsulin, PI
Attractin蛋白抗體Enterobacter sp.提供形式: 凍干物;凍結物模式菌株: no培養基: 820生長條件: 22℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Rhizopus stolonifer提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0014生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Phaeosphaeria sp.提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 抑菌活性培養基: CM0014生長條件: 28C存儲條件: 真空冷凍干燥
Apiospora sp.提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 25-28℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;礦物油法;定期移植法
Mesorhizobium robiniae分離基物: 小花棘豆提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 2生長條件: 30存儲條件: 定期移植法
Aspergillus flavus Link分離基物: 葡萄園提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 28存儲條件: 定期移植法
Pichia pastoris提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 高效表達、分泌、脂肪酶培養基: 0013生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;礦物油法
Lentinula edodes提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 食用菌, 香菇多糖培養基: 0017生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
巨大芽孢桿菌種屬: Bacillus megatherium de Bary安全等級: 1模式菌株: no培養基: 營養肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 20.0g,蒸餾水 1.0L,pH7.0。[注] 培養芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件: 30℃,好氧