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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1928 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 正常外周血組織 | 種屬來(lái)源 | 小鼠 |
| 生長(zhǎng)特性 | 懸浮 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 小鼠B淋巴細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1928 |
組織來(lái)源 | 正常外周血組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來(lái)源 | 小鼠 | 傳代特性 | 根據(jù)細(xì)胞特性 |
生長(zhǎng)特性 | 懸浮 | 細(xì)胞形態(tài) |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
B淋巴細(xì)胞的祖細(xì)胞存在于胎肝的造血細(xì)胞島中，此后B淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生和分化場(chǎng)所逐漸被骨髓所代替。成熟的B細(xì)胞主要定居于淋巴結(jié)皮質(zhì)淺層的淋巴小結(jié)和脾臟的紅髓和白髓的淋巴小結(jié)內(nèi)。B細(xì)胞在抗原刺激下可分化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞可合成和分泌抗體（免疫球蛋白），主要執(zhí)行機(jī)體的體液免疫。 B細(xì)胞在骨髓內(nèi)分化各階段的主要變化為免疫球蛋白基因的重排和膜表面標(biāo)志的表達(dá)。B細(xì)胞在發(fā)育分化過(guò)程中，同樣也經(jīng)歷選擇作用，以除去非功能性基因重排B細(xì)胞和自身反應(yīng)性B細(xì)胞，形成周圍成熟的B細(xì)胞庫(kù)。B細(xì)胞表面有多種膜表面分子，識(shí)別抗原、與免疫細(xì)胞和免疫分子相互作用，也是分離和鑒別B細(xì)胞的重要依據(jù)。B細(xì)胞表面分子主要有白細(xì)胞分化抗原、MHC以及多種膜表面受體。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；SAH301
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；2-1
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；MA-3G6
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；DN-H12
抗ALV-A雞胚成纖維細(xì)胞系；DF-1/A
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；DN-2H5
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；MA-4G8
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；1H10
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；MA-1G2
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；14E4
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)；胞CHO-S/K7OE10-1D6
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；11A7
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞；CHO-S/H9C2
小鼠潘氏細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞株；GCLP
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；4-1
液體乳糖培養(yǎng)基
China Blue Agar
液體亞硒鹽胱培養(yǎng)基
連四硫酸鹽培養(yǎng)基
Tetrathionate Medium
煌綠瓊脂培養(yǎng)基
Brilliant Green Agar Medium
XLD瓊脂培養(yǎng)基
XyloseLysineDesoxycholate Agar Medium
亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基
小鼠B淋巴細(xì)胞Bismuth Sulfite Agar Medium
麥康凱瓊脂培養(yǎng)基
Maconkey Agar Medium
伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（Levine）
Levine EosinMethylene Blue Agar Medium
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