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詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠腎小球內皮細胞 | 商品貨號 | A01X1835 |
組織來源 | 腎組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 可傳2-3代 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 內皮細胞樣 |
包被條件：
培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介 |
小鼠腎小球內皮細胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內代謝產物及某些廢物、毒物，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質，如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、碳等，以調節水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內環境的穩定，使新陳代謝得以正常進行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構造。血液經由入球小動脈進入腎小球。腎小球內的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內，微血管受到高壓，而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進行。微血管中的血液經由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球內皮細胞是一類特殊微血管類型的細胞。細胞為圓形、多角形，單層貼壁生長；細胞質豐富，細胞核為圓形或卵圓形。腎小球內皮細胞被覆于腎小球毛細血管壁腔側，與血流直接接觸，是腎小球濾過膜的第一道屏障，可粘附細菌和白細胞，修復基底膜，并有抗凝、抗血栓的作用；所以，體外培養的腎小球內皮細胞在免疫學和病理生理學領域中具有重要的研究價值。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態呈內皮細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
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