試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定原理強(qiáng)堿性溶液中,雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物;紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān),故可用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。該方法測(cè)定范圍為1~10mg蛋白質(zhì),適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品,尤其是動(dòng)物材料。試劑組成和配置1、雙縮脲試劑×1瓶,4℃保存; 2、10mg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白×1支,-20℃保存; 3、標(biāo)準(zhǔn)蛋白配制:取10mg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白100μl加雙蒸水100μl,即得5mg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4。△A測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
冬菇屬周期蛋白依賴性激樣3抗體Human PP(Pepsin) ELISA Kit人肽基脯酰順?lè)串悩?gòu)(PPI)免疫試劑盒
煙草節(jié)桿菌殺菌肽/天蠶抗菌肽單克抗體Human Pro-MMP-10(Pro-Matrix Metalloproteinase 10) ELISA Kit人胎球蛋白A(Fetuin A)免疫試劑盒
灰色鏈霉菌灰色亞種第十七號(hào)染色體開放閱讀框87抗體Human PPAR-γ(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Gamma) ELISA Kit人胎盤生長(zhǎng)因子(PLGF)免疫試劑盒
洋蔥伯克霍爾德菌降鈣受體抗體Human PP13(Placental Protein13) ELISA Kit人胎盤堿性磷(PLAP)免疫試劑盒
膠孢補(bǔ)體C2a鏈多肽抗體Human PPAR-α(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Alpha) ELISA Kit人胎盤蛋白13(PP13)免疫試劑盒
沙門氏菌馬凝集試驗(yàn)抗原CD80抗體Human RIPK2(Receptor TNFRSF Interacting Serine Threonine Kinase 2) ELISA Kit人胎盤催乳(HPL)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌CD19抗體Human PPOX(Protoporphyrinogen Oxidase) ELISA Kit人胎兒血紅蛋白(HBF)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種C-C元件趨化因子26抗體Human PTP1B(protein tyrosine phosphatase 1B) ELISA Kit人胎兒纖連蛋白(fFN)免疫試劑盒
產(chǎn)克雷伯氏菌5號(hào)染色體開放閱讀框22抗體Human RLN2(Relaxin-2) ELISA Kit人鎖鏈(DES)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌鈣激活離子通道4蛋白抗體Human PTPRJ(Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type J) ELISA Kit人羧甲基賴(CML)免疫試劑盒
香栓菌嗜粒趨化蛋白3抗體Human PTPN14(protein tyrosine phosphatase, non-receptor type 14) ELISA Kit人羧化基質(zhì)谷蛋白(ucMGP)免疫試劑盒
栗疫菌嗜粒趨化蛋白3抗體Human PTPRN(Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type N) ELISA Kit人羧化不全骨鈣(ucOC)免疫試劑盒
鴨疫里氏桿菌趨化抗體Human PYGL(Glycogen Phosphorylase, Liver) ELISA Kit人髓樣分化因子88(MyD88)免疫試劑盒
空泡單胞菌5號(hào)染色體開放閱讀框55抗體Human PYGM(Glycogen Phosphorylase, Muscle) ELISA Kit人髓性核分化抗原(MNDA)免疫試劑盒
糞生黑蛋巢表面趨化因子受體7抗體Human Pro-MMP-13(Pro-Matrix Metalloproteinase 13) ELISA Kit人髓系觸發(fā)受體-1(TREM-1)免疫試劑盒
普茅斯沙雷氏菌色c氧化7A2抗體Human Rac-GAP1(Rac-GTPase Activating Protein 1) ELISA Kit人髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAG Ab)免疫試劑盒
詹氏生絲單胞菌Hyphomonas│jannaschiana 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRCD68分子試劑盒N,N’-二基蝙蝠葛堿化物
蘇云金芽胞桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:BCCD63分子試劑盒1,7-二羥基-3,4-二氧基山-7
褐囊蜜環(huán)菌Armillaria│bruneocystidia H.C. Wang,G.F. Qin & J. Zhao 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRCD5分子樣蛋白試劑盒β,β’-二基烯酰阿寧
雙縮脲法蛋白含量測(cè)試盒50管/48樣粉粒紅濕傘 D-肉堿3,4二羥基Elisa
*蛹蟲草(北冬蟲夏草、北蟲草) 鄰苯二-Ο,Ο′-二乙酸谷氧還蛋白Elisa
頂孢頭孢霉 2--5-(三氟甲基)苯磺酰甘膽酸Elisa
皺紋單胞 亞硝酸叔丁酯I型膠原蛋白Elisa
北土地桿 4--3-硝基吡啶鹽酸鹽II型膠原蛋白Elisa
枯草芽孢桿 1,2-乙二硫S100A12鈣結(jié)合蛋白Elisa
隔離土地桿 3-羥基丁酸乙酯膽囊收縮Elisa
炭疽芽胞桿 2-溴噻唑-5-甲酸血管緊張IIElisa
細(xì)鏈格孢 2,6-二甲基芐腎Elisa
巴奈特酵母 5-硝基吲唑多藥耐藥相關(guān)蛋白2Elisa
煙管 3-乙基-5-(2-)-4-甲基噻唑溴化物胞壁酰二肽3Elisa
布氏白僵(卵孢白僵) 6-核苷微管相關(guān)蛋白7Elisa
枯草芽胞桿 乙酰酸乙酯環(huán)氧化2Elisa
釀酒酵母 2-氨基噻唑-4-甲酸乙酯c-Kit蛋白Elisa
大腸桿 2-氨基-5-氟β1 腎上腺受體抗體Elisa