產(chǎn)品分類:細(xì)胞組分分離
儲(chǔ)存條件:4℃,6個(gè)月
用途:酵母細(xì)胞中分離質(zhì)膜
注意事項(xiàng):主要由0.4M蔗糖、2mmM EDTA、25mM咪唑組成。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購(gòu)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
蔗糖咪唑溶液 | 100ml | FS-R6525 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來(lái)水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái),保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來(lái)確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
布林佐(標(biāo)準(zhǔn)品) Axitinib胱抗體包裝5g
(標(biāo)準(zhǔn)品) Azaperone胰凝乳蛋白B抗體包裝1g
;丁氧(標(biāo)準(zhǔn)品) Azasetron HCl補(bǔ)體C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白2抗體包裝5g
草(標(biāo)準(zhǔn)品) Azelastine base 分化促進(jìn)因子77抗體包裝25g
草依地普侖/草(標(biāo)準(zhǔn)品) Bacitracin Zinc 半胱蛋白抑制劑樣蛋白1抗體包裝5g
茶海明(標(biāo)準(zhǔn)品) Benazepril HydrochlorideCTBS蛋白抗體包裝25g
蟾它靈(標(biāo)準(zhǔn)品) Benazepril Hydrochloride硫軟骨β1/β-1,4-GalNAc-T抗體包裝5g
蟾酥;華蟾酥基;華蟾精(標(biāo)準(zhǔn)品) Bezafibrate硫軟骨聚合3抗體包裝25g
長(zhǎng)春(標(biāo)準(zhǔn)品) Bezafibrate胎盤催乳1/2抗體包裝5g
長(zhǎng)春(標(biāo)準(zhǔn)品) Blonanserin酪激C-SRC抗體包裝25g
長(zhǎng)春質(zhì)堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Brivudine磷化酪激C-SRC抗體包裝5g
朝藿定B(標(biāo)準(zhǔn)品) Brivudine酪蛋白激1/casein kinase Iα抗體包裝1g
赤蘚紅(標(biāo)準(zhǔn)品) Cabazitaxel半胱延伸蛋白α抗體包裝1g
醋己鋅(標(biāo)準(zhǔn)品) Mitoxantrone磺基轉(zhuǎn)移CSPS抗體包裝100g
醋谷/乙酰谷酰(標(biāo)準(zhǔn)品) Lamotrigine富含半胱蛋白2抗體包裝25g
猴頭菇99Hericium erinaceus 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR,可用于培養(yǎng)血管緊張1-7試劑盒;Thymopentin
傳染性支氣管炎病毒Coronavirus│Infectious bronchitis virus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血管活性腸肽試劑盒細(xì)辛脂;(-)-asarinin
東京根霉Rhizopus│tonkinensis 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR血管動(dòng)蛋白試劑盒仙鶴草B;agrimol B
蔗糖咪唑溶液Neuro D/FITC 熒光標(biāo)記抗神經(jīng)源分化因子IgG3,4-二溴苯 99%
Neurofascin-155/FITC 熒光標(biāo)記神經(jīng)束蛋白-155IgG丁酰酯 97%
NF2/merlin /FITC 熒光標(biāo)記2型神經(jīng)纖維瘤IgG異丁葉酯 97%
NF-66/a-Internexin/FITC 熒光標(biāo)記α-中連蛋白IgG3-羥-2-硝吡啶 98.0 %
NFAM1/CNAIP/FITC 熒光標(biāo)記NFAM1IgG一酯 99%
NFATc1/FITC 熒光標(biāo)記活化T核因子1蛋白IgG2,3-吡啶二羧酐 98%
NFBD1/MDC1/FITC 熒光標(biāo)記DNA損傷關(guān)卡蛋白1IgG1-烯咪唑 99%
p-NFATc2/FITC 熒光標(biāo)記化NFATc2IgG2-氨-5-溴吡啶 98%