產(chǎn)品分類:培養(yǎng)基
儲(chǔ)存條件 室溫,24個(gè)月
用途 zui經(jīng)典、zui通用的細(xì)菌培養(yǎng)用固體培養(yǎng)基,本配方為L(zhǎng)B Miller的配方,含瓊脂。leagene推薦用于大腸桿菌培養(yǎng)。
注意事項(xiàng) 主要由酵母提取物、胰蛋白胨、氯化鈉、瓊脂等組成,如要求無(wú)菌,可高壓滅菌15~20min。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購(gòu)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
LB固體培養(yǎng)基粉劑 | 1L | FS-R6403 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來(lái)水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái),保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來(lái)確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族V成員2(TRPV2)TRPV2 ELISA Kit紅2,3 - 二磷甘油合成抗體包裝1g
轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族V成員1(TRPV1)TRPV1 ELISA Kit布氏桿菌菌體蛋白抗體包裝5g
轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族M成員4(TRPM4)TRPM4 ELISA Kit磷化B-Raf抗體包裝100ml
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)TGFβI ELISA Kit磷化B-Raf抗體包裝500ml
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅱ(TGFβR2)TGFβR2 ELISA Kit多聚合苷激3磷化抗體包裝25ml
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅰ(TGFβR1)TGFβR1 ELISA Kit癌易感基因1抗體包裝1ml
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGFβ3)TGFβ3 ELISA KitBcl-2同源拮抗劑抗體包裝5ml
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)TGFβ1 ELISA Kitβ3腎上腺能受體抗體包裝1g
主要堿性蛋白(MBP)MBP ELISA Kit腦鈉/鈉肽抗體包裝5g
軸突生長(zhǎng)誘向因子1(Ntn1)Ntn1 ELISA KitBZW2蛋白抗體包裝1g
周期依賴性激抑制因子2A(CDKN2A)CDKN2A ELISA Kit緩激肽B1受體抗體包裝1g
周期依賴性激抑制因子1A(CDKN1A)CDKN1A ELISA Kit鈣激活通道蛋白α1抗體包裝250mg
周期依賴性激8(CDK8)CDK8 ELISA Kit卵黃狀黃斑病蛋白2抗體包裝5g
重肽鐵蛋白(FTH)FTH ELISA Kit絲/蘇蛋白激SAD-B抗體包裝1g
腫廇蛋白P63(TP63)TP63 ELISA Kit鼻咽癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝25g
去整合樣金屬蛋白19抗體肌肉生長(zhǎng)抑制(MSTN)FRAX597 is a potent, ATP-competitive inhibitor of group I PAKs with IC50 of 8 nM
LB固體培養(yǎng)基粉劑FANCF/FITC 熒光標(biāo)記范可貧血相關(guān)蛋白FIgG對(duì)酰氨 ,≥99.5%
FAS/FITC 熒光標(biāo)記FAS蛋白IgG對(duì)酰氨 藥用級(jí)
FASN/FITC 熒光標(biāo)記抗脂肪合成IgG鹽克侖特羅 98%,(劇品)
FasL/FITC 熒光標(biāo)記FasL蛋白IgG鹽克侖特羅 ,99.1%(劇品)
FAST kinase/FITC 熒光標(biāo)記抗Fas活化的絲/蘇氨激IgG鹽二雙胍 97%
FBN1 /FITC 熒光標(biāo)記原纖維蛋白1IgG間二芐 97%
Fc GammaR II A/CD32a/FITC 熒光標(biāo)記免疫球蛋白G Fc段受體ⅡIgG液體石蠟 USP級(jí)
FDC-SP/FITC 熒光標(biāo)記抗B淋巴表面結(jié)合蛋白IgG二酰 97%