產(chǎn)品分類:細胞組分分離
儲存條件:4℃,避光,12個月
用途:用于乙醇酸氧化酶的提取。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
乙醇酸氧化酶提取試劑 | 2×500ml | FS-R6563 |
配制與標(biāo)定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
(標(biāo)準(zhǔn)品) Sulforhodamine B白喉酰生物合成樣蛋白2抗體包裝25g
羥煙(標(biāo)準(zhǔn)品) Sulforhodamine BNotch信號通路Delta樣配體3抗體包裝5g
羥(標(biāo)準(zhǔn)品) Rhodamine 110 chloride動力蛋白激活蛋白2抗體包裝1g
草(標(biāo)準(zhǔn)品) Rhodamine 123視神經(jīng)相關(guān)蛋白/早老結(jié)合蛋白抗體包裝25g
青霉G(標(biāo)準(zhǔn)品) Trimebutine baseDHX螺旋抗體包裝5g
琥珀單酯(標(biāo)準(zhǔn)品) 6-Carboxytetramethylrhodamine轉(zhuǎn)運蛋白DISP2抗體包裝10g
琥珀鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) 6-TAMRA, SE DNA聚合α2抗體包裝50g
(標(biāo)準(zhǔn)品) Ovalbumin/Egg albumins短鏈脫氫/還原家族7B抗體包裝100g
氫噻(標(biāo)準(zhǔn)品) Miltefosine膜二肽3抗體包裝25g
氫達那新(標(biāo)準(zhǔn)品) Miltefosine雙特異性磷13抗體包裝500g
氫后馬托品(標(biāo)準(zhǔn)品) 1-Naphthyl PP1DIM-7蛋白抗體包裝1g
氫加蘭他敏(標(biāo)準(zhǔn)品) Aliskiren hemifumarate核糖核Dicer抗體包裝25g
氫力克敏(標(biāo)準(zhǔn)品) Epothilone D內(nèi)皮和平滑肌衍生的神經(jīng)纖毛蛋白抗體包裝5g
氫右沙芬(標(biāo)準(zhǔn)品) Calcium levofolinate含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號抑制物盒蛋白家族2抗體包裝100ml
氫樟柳堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Afatinib dimaleate /BIBW2992-MA2DNA連接1抗體包裝500ml
草本枝孢Cladosporium│herbarum 質(zhì)量規(guī)格:≥99%,BR蝸牛同源物2試劑盒石松靈堿;Lycodoline
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品蝸牛同源物1試劑盒山羊豆堿;Galegine
節(jié)桿菌屬Arthrobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:≥98.5%,BR胃粘膜相關(guān)淋巴樣組織淋巴瘤抗體試劑盒藤子;Embelin
乙醇酸氧化酶提取試劑PAK2 /FITC 熒光標(biāo)記p21激活激2IgG
Phospho-PAK2 (Ser20) /FITC 熒光標(biāo)記化p21激活激2IgG
PAK4/FITC 熒光標(biāo)記p21激活激4IgG
Phospho-PAK4 (Ser474)/PAK5 (Ser602)/PAK6 (Ser560) /FITC 熒光標(biāo)記化p21激活激4、5、6IgG
PAK7/PAK5/MBT/FITC 熒光標(biāo)記抗激活激PAK7/PAK5IgG
-phospho-P70 S6 Kinase beta (Thr228) /FITC 熒光標(biāo)記抗化核糖體S6蛋白激IgG
Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr421/Ser424) /FITC 熒光標(biāo)記化核糖體S6蛋白激β2IgG
phospho-P70 S6 Kinase beta (Ser371)/FITC 熒光標(biāo)記化核糖體S6蛋白激IgG