詳細介紹
產品分類:細胞培養
儲存條件 4℃,6個月
用途 聚乙二醇誘導細胞融合,以獲得單克隆抗體的雜交瘤細胞,誘導細胞雜交
注意事項 無菌溶液。作用原理使能夠改變各類細胞的膜結構,使兩細胞接觸點處質膜的脂類分子發生疏散和重組,兩細胞接口處在雙分子層質膜的相互親和以及彼此的表面張力作用下,細胞發生融合。
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
PEG誘導細胞融合試劑盒 | 50T | FS-R6395 |
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5) 之后更換正常培養基培養即可。
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瘦受體(Leptin receptor)Leptin receptor ELISA KitBH3結構域凋亡誘導蛋白抗體包裝100ml
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嗜性粒細胞趨化因子(Eotaxin)Eotaxin ELISA Kit堿性成纖維生長因子抗體包裝250mg
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凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX-1)LOX-1 ELISA Kitβ葡聚糖受體抗體包裝100g
苗條受體(Leptin receptor)Leptin receptor ELISA Kit蛇蛋白巴曲抗體包裝500g
苗條(OB)OB ELISA Kit受體性蛋白酪激ETK抗體包裝25mg
苗條(LEP)LEP ELISA Kit磷化受體性蛋白酪激ETK抗體包裝25g
粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)GMCSF/CSF2 ELISA Kit磷化相關死亡促進因子抗體包裝5g
可溶性E選擇(sE-selectin)sE-selectin ELISA KitBarX1蛋白抗體包裝100g
染色體脆弱性相關基因抗體干擾α4(IFNα4)Epirubicin hydrochloride (4'-Epidoxorubicin hydrochloride) 是阿霉的半合成的 L-阿伯糖衍生物,能
PEG誘導細胞融合試劑盒EPEC/E.coli /FITC 熒光標記兔抗腸致病性大腸桿菌IgG酰化 活力≥30000u/g
EphA1 R/FITC 熒光標記抗EphA1-R受體IgG大豆油 試劑級
EphA2 R/FITC 熒光標記兔抗人、大、小鼠酪氨蛋白激受體A2IgG大豆油 藥用級
Phospho-EphA2 (Tyr594) /FITC 熒光標記兔抗人、大、小鼠化酪氨蛋白激A2受體IgG4--2-酮戊鈣 98%
EphA4 R/FITC 熒光標記酪氨蛋白激受體A4IgG CP,98.0%(劇品)
EphA4/FITC 熒光標記抗酪氨蛋白激A4IgG透明質鈉 95%,來源:雞
EphB2 R/FITC 熒光標記酪氨蛋白激受體B2IgG酰苯 AR,99.0%
EphB6R/Eph receptor B6/FITC 熒光標記酪氨蛋白激受體B6IgG3-氨 98%