產(chǎn)品分類:微生物染色
儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月
用途:立克次體和病毒包涵體染色,改良馬氏法
注意事項(xiàng):立克次體和一些病毒包涵體呈紅色,背景呈藍(lán)色。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
立克次體染色液 | 3×50ml | FS-R7071 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來,保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
副雞嗜血桿菌結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1抗體Human EPYC(Epiphycan) ELISA Kit人膜內(nèi)酰基肽(ANPEP)免疫試劑盒
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耐輻射奇球菌CSMD2蛋白抗體Human ERα(Estrogen Receptor Alpha) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅶ(ANX-Ⅶ)免疫試劑盒
阿華蠟孔菌CSMD3蛋白抗體Human EFNA4(Ephrin A4) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅵ(ANX-Ⅵ)免疫試劑盒
金耳鈣調(diào)神經(jīng)磷CSTP1抗體Human ERK1(Extracellular Signal Regulated Kinase 1) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)抗體(IgM)免疫試劑盒
釀酒酵母CTAGE6蛋白抗體Human EL/LIPG(Endothelial Lipase) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)抗體(IgG)免疫試劑盒
苔原彎頸霉皮膚T淋巴瘤相關(guān)抗原4抗體Human EFNA5(Ephrin A5) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)免疫試劑盒
葛氏膜蛋白CLDND2抗體Human ELA2B(Elastase 2B) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅳ(ANX-Ⅳ)免疫試劑盒
膠紅酵母含半胱和組豐富域蛋白1抗體Human Des(Desmin) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅲ(ANX-Ⅲ)免疫試劑盒
嗜熱假諾氏菌豬圓環(huán)病Ⅱ型衣殼蛋白Human ELA3B(Elastase 3B) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅱ(ANX-Ⅱ)免疫試劑盒
大豆慢生根瘤菌抗菌肽CAMP抗體Human DHEA-S(Dehydroepiandrosterone Sulfate) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)免疫試劑盒
釀酒酵母卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白134抗體Human DPD(Deoxypyridinoline) ELISA Kit人膜結(jié)合型IgM(mIgM)免疫試劑盒
人蒼白桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白69抗體Human DPT(Dermatopontin) ELISA Kit人膜攻擊復(fù)合物(MAC)免疫試劑盒
節(jié)桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白98抗體Human DPP6(Dipeptidyl Peptidase VI) ELISA Kit人膜輔蛋白(MCP/CD46)免疫試劑盒
紅細(xì)菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白70抗體Human DLD(Dihydrolipoyl Dehydrogenase) ELISA Kit人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激(AMH)免疫試劑盒
鐮孢霉卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白51抗體Human DR-70TM(Tumor Marker DR-70 For Lung Cancer) ELISA Kit人苗條受體(LR/Ob-R)免疫試劑盒
蟲擬蠟菌Ceriporiopsis│subvermispora 質(zhì)量規(guī)格:D,99.96%Alpha-D /維生E試劑盒橙黃Ⅱ
輪枝菌Verticillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%alpha-1腎上腺能受體試劑盒橙黃Ⅰ
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%AFG3樣蛋白2試劑盒雌
立克次體染色液HAase(Human Hyaluronidase) ELISA Kit 人透明質(zhì)suanmei規(guī)格: 48T
AST(Human Aspartate aminotransferase) ELISA Kit 人天門冬氨suan氨基轉(zhuǎn)移mei規(guī)格: 48T
ACP(Human Acid Phosphatase) ELISA Kit 人suan性磷suanmei規(guī)格: 48T
GPI(Human glucose-6-phosphate isomerase) ELISA Kit 人葡萄糖6磷suan異構(gòu)mei規(guī)格: 48T
PGM(Human Phosphoglucomutase) ELISA Kit 人磷suan葡萄糖變位mei規(guī)格: 48T