詳細介紹
產品分類:核酸雜交
儲存條件:—20℃,避光,6個月
用途:核酸雜交
注意事項:主要由去離子甲酰胺、SSC、SDS、變性鮭魚精DNA、DEPC水等組成,使用前避免污染。
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
核酸預雜交液 | 50ml | FS-R7399 |
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5) 之后更換正常培養基培養即可。
白布勒擔孢酵母有絲分裂驅動蛋白樣2抗體Human SOX18(Transcription factor SOX-18) ELISA Kit可溶性轉鐵蛋白受體(sTfR)
芽胞桿菌屬微原纖維膠原相關蛋白1抗體Human HEPH(Hephaestin) ELISA Kit可溶性腫瘤壞死因子樣凋亡弱誘導因(sTweak)
嗜乳桿菌減數分裂核分裂蛋白1抗體Human SPON2(Spondin-2) ELISA Kit可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sTRAIL)
彩色豆馬勃肌原調節抑制蛋白抗體Human C1QC(Complement C1q subcomponent subunit C) ELISA Kit可溶性腫瘤壞死因子受體2(sTNF-R2)
游動球菌雙微體2癌基因結合蛋白抗體Human SIRT4(NAD-dependent ADP-ribosyltransferase sirtuin-4) ELISA Kit可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)
小粒凱斯特亞菌基質金屬蛋白20Human GDF11(Growth/differentiation factor 11) ELISA Kit可溶性粘附分子(Sam)
Patulibacter americanus多藥耐藥相關蛋白8抗體Human FABP5(Fatty acid-binding protein, epidermal) ELISA Kit可溶性血小板內皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)
大肥菇多藥耐藥相關蛋白7抗體Human PFN2(Profilin-2) ELISA Kit可溶性血纖蛋白單體復合物(SFMC)
卷枝毛霉卷枝變型磷化波西氏肉瘤皰疹病潛伏核抗原相互作用蛋白1抗體Human NCOR1(Nuclear receptor corepressor 1) ELISA Kit可溶性血管內皮粘附分子1(sVCAM-1)
解淀粉芽孢桿菌酪蛋白激分裂抗體Human NDN(Necdin) ELISA Kit可溶性血管內皮蛋白C受體(sEPCR)
大豆慢生根瘤菌波西氏肉瘤皰疹病潛伏核抗原相互作用蛋白1抗體Human IL31RA(Interleukin-31 receptor subunit alpha) ELISA Kit可溶性血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)
黏連環紋炭團菌黑色瘤抗原F蛋白家族1抗體Human S1PR5(Sphingosine 1-phosphate receptor 5) ELISA Kit可溶性血管內皮生長因子受體1(sVEGF R1)
香菇糖蛋白GNTVA抗體Human HNRNPK(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K) ELISA Kit可溶性胸苷激1(TK1)
球形賴芽孢桿菌IGFBP2結合蛋白/遷移和侵潤抑制蛋白抗體Human ANXA3(Annexin A3) ELISA Kit可溶性腺苷環化(sAC)
豬丹絲菌微管相關蛋白1B抗體Human ANXA1(Annexin A1) ELISA Kit可溶性因子受體(sCKR)
多主枝孢錯配修復蛋白3抗體Human NCOR2(Nuclear receptor corepressor 2) ELISA Kit可溶性間粘附分子1(sICAM-1)
肺炎克雷伯氏菌Klebsiella│pneumoniae 質量規格:活1:2500,BR元
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質量規格:活1:4500,BR秋仙堿
: AS2.247資源名稱: 粟酒裂殖酵母 質量規格:>98%,BR金雀花堿
核酸預雜交液AQP-2(Mouse Aquaporin 2) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白2規格: 48T
TG(Mouse Thyroglobulin) ELISA Kit 小鼠jia狀腺球蛋白規格: 48T
INH-A(Mouse Inhibin) ELISA Kit 小鼠抑制suA規格: 48T
Beta-CG(Mouse Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit 小鼠絨毛膜促性腺激suβ規格: 48T
SHBG(Mouse sex hormone-binding globulin) ELISA Kit 小鼠性激su結合球蛋白規格: 48T