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Ant

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產品分類：酶抑制劑

儲存條件：—20℃,避光,12個月

用途：蛋白酶抑制劑

注意事項：主要由碘乙酰胺iodacetamide等組成，不含EDTA。提取出來的蛋白可以用于Western Blot、免疫共沉淀等試驗。工作濃度是10-100umol/L。亦有用10mmol/L。

 

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。

鏈輪枝菌環指蛋白121抗體Anti-DCK Antibody粘蛋白5B(MUC5B)

假單胞菌屬環指蛋白169抗體Anti-DCN Antibody粘蛋白5AC(MUC5AC)

毛木耳環指蛋白113A抗體Anti-DCC Antibody粘蛋白4(MUC4)

枯草芽孢桿菌枯草亞種（現貨）環指蛋白43抗體Anti-DCN Antibody(PB0132)粘蛋白21(MUC21)

米舒青霉腫瘤血管內皮標記蛋白2抗體Anti-DCN Antibody粘蛋白20(MUC20)

根瘤菌環指蛋白14抗體Anti-DCX Antibody粘蛋白17(MUC17)

新城疫病RAS相關GTP結合蛋白A抗體Anti-DDAH1 Antibody粘蛋白13(MUC13)

楊樹菇絲蘇激1受體相互作用蛋白抗體Anti-DDAH2 Antibody粘蛋白12(MUC12)

布蘭克假絲酵母CASP2凋亡相關蛋白抗體Anti-DDB1 Antibody(PB0607)粘蛋白1(MUC1)

瑞士乳桿菌DNA修復和重組蛋白RAD54B抗體Anti-DDB2 Antibody增殖關聯蛋白2G4(PA2G4)

玉蜀黍赤霉菌畸胎瘤癌基因RAS相關病抗體Anti-DDIT3 Antibody造血蛋白1(HEM1)

乳乳球菌霍氏亞種Ras-GTP激活蛋白3抗體Anti-DDB2 Antibody造血蛋白(HEMGN)

神經內分泌特異性蛋白抗體Anti-DDR1 Antibody造骨鈣黏蛋白(CDHOB)

接骨木鐮孢視黃脫氫11/型肝炎病核心蛋白抗體Anti-DDR1 Antibody皂(Haponin)

釀酒酵母維甲相關孤兒受體β抗體Anti-DDR2 Antibody早幼粒白血病蛋白(PML)

黃綠木霉G蛋白GTP-GDP解離激因子1抗體Anti-DDT Antibody早期生長應答因子4(EGR4)

ATCC9372資源名稱: 芽孢桿菌 質量規格：BR，98.5%

灰平鏈霉菌Streptomyces│griseoplanus Backus et al. 質量規格：>98%,BR

柳樹爛皮病Cytospora│salicis (Corda) Rabenh. 質量規格：>99%,BR
碘乙酰胺溶液ASIC1/BNaC2/FITC  熒光su標記suan敏感離子通道1IgG規格： 0.2ml

ASK1/MAPKKK5 /FITC  熒光su標記細胞凋亡信號調節激mei1/絲裂原活化蛋白激mei激mei激mei5IgG規格： 0.2ml

ASK1(phospho Ser83) /FITC  熒光su標記兔抗人、大、小鼠磷suan化細胞凋亡信號調節激mei1IgG規格： 0.2ml

phospho-ASK1(Thr845) /FITC  熒光su標記兔抗人、小鼠磷suan化細胞凋亡信號調節激mei1IgG規格： 0.2ml

ASK1(phospho Ser967) /FITC  熒光su標記兔抗人、大、小鼠磷suan化細胞凋亡信號調節激mei1IgG規格： 0.2ml

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。

5）   之后更換正常培養基培養即可。