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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
糊精水溶液 | 100ml | FS-R7011 |
產(chǎn)品分類:脂類染色
儲(chǔ)存條件:室溫,12個(gè)月
用途:油紅O染色中的襯染劑
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來(lái)水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái),保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
假黃單胞菌屬癌胚抗原單克抗體(檢測(cè))Human CREB3L2 ELISA Kit山羊腦啡肽(ENK)免疫試劑盒
凍土毛霉癌基因c-Raf抗體Human CREST ELISA Kit山羊免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒
兩歧雙歧桿菌Ⅲ型膠原蛋白/膠原蛋白3/3型膠原蛋白抗體Human CREB1 ELISA Kit山羊免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒
球形節(jié)桿菌黑色瘤相關(guān)抗原抗體Human Claudin 7 ELISA Kit山羊免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒
黃孢紫紅菇CD33抗體Human CREB3L2 ELISA Kit山羊粒巨噬集落激因子(GM-CSF)免疫試劑盒
希瓦氏菌*睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體α抗體Human CD81(CD81 antigen) ELISA Kit山羊口蹄疫抗體(FMDV IgM)免疫試劑盒
釀酒酵母CD7抗體Human CKS2 ELISA Kit山羊(Cortisone)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2抗體Human CEP44 ELISA Kit山羊抗尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)免疫試劑盒
短芽孢桿菌CD68抗體Human CEP55 ELISA Kit山羊結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)免疫試劑盒
東方伊薩酵母緊密連接蛋白1抗體Human CD94 ELISA Kit山羊堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)免疫試劑盒
尖孢鐮刀菌膜輔蛋白抗體Human CD9(CD9 antigen) ELISA Kit山羊甲狀腺(T4)免疫試劑盒
委內(nèi)瑞鏈霉菌CXC趨化因子16抗體Human CEP63 ELISA Kit山羊甲狀旁腺激(PTH)免疫試劑盒
新疆鹽地桿菌色c氧化IV亞型1抗體Human CEP350 ELISA Kit山羊黃體生成(LH)免疫試劑盒
球孢枝孢1號(hào)染色體開放閱讀框227抗體Human CDC14B ELISA Kit山羊氧化(XOD)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌2號(hào)染色體開放閱讀框71抗體Human CD81(CD81 antigen) ELISA Kit山羊還原型(GSH)免疫試劑盒
淡青鏈霉菌質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體Human CEP44 ELISA Kit山羊過(guò)氧化氫(CAT)免疫試劑盒
酵母菌Saccharomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRp物質(zhì)試劑盒次堿
木霉Trichoderma│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRP鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白試劑盒羅漢松樹脂
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRProminin 2試劑盒定堿
糊精水溶液CGRP(Human calcitonin gene related peptide) ELISA Kit 人降鈣su基因相關(guān)肽規(guī)格: 48T
SS(Human Somatostatin) ELISA Kit 人生長(zhǎng)抑su規(guī)格: 48T
GHRP(Human Growth Hormone Releasing Peptide) ELISA Kit 人生長(zhǎng)激su釋放多肽規(guī)格: 48T
INH-B(Human inhibin B) ELISA Kit 人抑制suB規(guī)格: 48T
TRH(Human growth hormone releasing hormone) ELISA Kit 人促jia狀腺su釋放激su規(guī)格: 48T
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來(lái)確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。