詳細(xì)介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物:常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 |
英文名稱 | ANKRD12 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗(yàn)、研究實(shí)驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,產(chǎn)品品質(zhì),價(jià)格實(shí)惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善。抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點(diǎn)
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動(dòng)物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實(shí)驗(yàn)活體。
3、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。
4、試取血樣進(jìn)行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實(shí)驗(yàn)活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
血管生成素1ANG-1豬血管生成素1英文名稱:Porcine Angiopoietin 1, ANG-1
乙酰膽堿受體抗體AChRab豬乙酰膽堿受體抗體英文名稱:Porcine acetylcholine receptor antibody, AChRab
熱休克蛋白90HSP-90豬熱休克蛋白90英文名稱:Porcine Heat Shock Protein 90, HSP-90
熱休克蛋白70HSP-70豬熱休克蛋白70英文名稱:Porcine Heat Shock Protein 70, HSP-70
熱休克蛋白40HSP-40豬熱休克蛋白40英文名稱:Porcine Heat Shock Protein 40, HSP-40
熱休克蛋白20HSP-20豬熱休克蛋白20英文名稱:Porcine Heat Shock Protein 20, HSP-20
C反應(yīng)蛋白CRP豬C反應(yīng)蛋白英文名稱:Porcine C-reactive protein, CRP
可溶性細(xì)胞間粘附分子1sICAM-1豬可溶性細(xì)胞間粘附分子1英文名稱:Porcine Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1, sICAM-1
可溶性P選擇素sP-Selectin豬可溶性P選擇素英文名稱:Porcine soluble P-selectin, sP-Selectin
白介素17IL-17豬白介素17英文名稱:Porcine interleukin 17, IL-17
髓磷脂堿性蛋白MBP豬髓磷脂堿性蛋白英文名稱:Porcine myelin basic protein, MBP
生長激素釋放多肽GHRP豬生長激素釋放多肽英文名稱:Porcine Growth Hormone Releasing Peptide, GHRP
α干擾素IFN-α豬α干擾素英文名稱:Porcine Interferon α, IFN-α
磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶pERK豬磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶英文名稱:Porcine phospho-extracellular signal-regulated kinase, pERK
乙酰膽堿ACh豬乙酰膽堿英文名稱:Porcine acetylcholine, ACH
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體Streptomyces rochei分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Bradyrhizobium japonicum提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 與大豆共生固氮,培養(yǎng)基pH4.2生長培養(yǎng)基: 0053生長條件: 28-30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;礦物油法
Rhizopus stolonifer分離基物: 黃油提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0017生長條件: 25-28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Alteromonas marina分離基物: 水樣/深層海水提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 大西洋細(xì)菌培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Lactobacillus casei分離基物: 發(fā)酵牛乳提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 用于分類學(xué)研究以及發(fā)酵乳制品培養(yǎng)基: 6生長條件: 37℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Aspergillus niger分離基物: 醋醅提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 釀醋用糖化菌。培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃存儲(chǔ)條件: 定期移植法;其他
Auricularia molerii提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 菌種分類,食用菌。培養(yǎng)基: 17生長條件: 27℃存儲(chǔ)條件: 定期移植法
Candida tropicalis分離基物: 水樣/上層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)酶微生物/植酸酶培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法
傷寒沙門氏菌種屬: Salmonla typhi提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 噬菌體分型用 Vi 28 9,12,Vi d -培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法