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詳細介紹
大腸桿菌O157：H7顯色培養(yǎng)基是青島海博生物公司改良的培養(yǎng)基，用于食品、病人糞便樣品中O157：H7菌的快速檢測。O157：H7菌顯亮紅色、淡紅色或紅色，菌落周圍沒有藍色暈圈，大腸桿菌和大腸菌群顯暗藍色、藍色或紫色，菌落周圍有藍色暈圈；其它細菌顯藍色、黃色或無色。本培養(yǎng)基的特異性高，可以克服SMAC培養(yǎng)基引起的假陽性和假陰性結(jié)果，是一種很理想的快速檢測培養(yǎng)基。
成份(g/L)
| 特殊營養(yǎng)物質(zhì) | 68.4 |
| 混合顯色劑 | 2.6 |
| 瓊脂 | 15.0 |
| pH7.0±0.1 25℃ | |
CT添加劑 1ml/支*5（已配套，無需另購）
此配方可以進行改良或增加營養(yǎng)成份以獲得最佳的結(jié)果。
用法
稱取本品17.2g 加入200ml 蒸餾水，加熱煮沸溶解并不停攪拌，加熱2分鐘左右。冷卻至45-50℃ 時，加入一支CT添加劑混勻，傾入無菌平皿。
注意：制備好的培養(yǎng)基一定要保持表面干燥，可在36℃ 的培養(yǎng)箱中倒置放置1-2小時。
原理
利用大腸桿菌O157 自身代謝產(chǎn)生的酶與相應(yīng)顯色底物反應(yīng)使菌落顯色，以區(qū)分目標菌與非目標菌。顯色底物是由產(chǎn)色因子和微生物部分可代謝物質(zhì)組成，在特異性酶作用下，游離出產(chǎn)色因子使菌落顯示一定顏色。
操作步驟
1、按國家標準、SN標準、FDA標準或其它方法制備樣品液；
2、取 25 克樣品液加入 225ml mEC肉湯或mTSB肉湯中，36℃ 增菌培養(yǎng) 18-24 小時；
3、用 3mm 接種環(huán)取 1 環(huán)增菌液，劃線接種到O157菌顯色培養(yǎng)基上，做 2 個平板；
4、36℃ 培養(yǎng) 18-24h，O157:H7菌顯亮紅色、淡紅色或紅色，菌落周圍沒有藍色暈圈；大腸桿菌和大腸菌群顯暗藍色、藍色或紫色，菌落周圍有藍色暈圈；其它細菌顯藍色、黃色或無色；
5、對典型菌落可做O157:H7菌血清學(xué)試驗和全套生化試驗。
注：必須在 36℃ 培養(yǎng) 24 小時內(nèi)判讀結(jié)果，以免菌落顏色發(fā)生變化。
質(zhì)量控制
1、外觀
此干燥培養(yǎng)基的粉末均勻，具有良好的流動性，呈灰白色。制備好的平板呈藍色固體培養(yǎng)基。
2、微生物試驗
在 36℃ 培養(yǎng) 18-24h 小時：
質(zhì)控菌株 | ATCC | 生長情況 | 菌落顏色 |
大腸桿菌O157 | 35150 | +++ | 亮紅色 |
金黃色葡萄球菌 | 25923 | -/+ | 黃色或無色 |
大腸桿菌 | 25922 | +/- | 暗藍色，菌落周圍有藍色暈圈 |
沙門氏菌 | 14028 | +++ | 藍色 |
奇異變形桿菌 | 12453 | +/- | 無色 |
肺炎克雷伯氏菌 | 10031 | +/- | 藍色，菌落周圍有藍色暈圈 |
弗氏檸檬酸鹽桿菌 | 43864 | +/- | 藍色菌落有紫色中心，菌落周圍有藍色暈圈 |
坂崎桿菌 | 29004 | ++ | 紫色至藍色 |
方法的局限性
典型特征
本培養(yǎng)基上的典型大腸桿菌O157:H7必須做血清學(xué)試驗或生化試驗。
典型特征
典型大腸桿菌O157:H7菌顯亮紅色、淡紅色或紅色，菌落周圍沒有藍色暈圈；大腸桿菌和大腸菌群顯藍色或紫色，菌落周圍有藍色暈圈；其它細菌顯藍色、黃色或無色；
 |  |
O157顯色培養(yǎng)基 大腸埃希氏菌O157：H7 ATCC35150 | O157顯色培養(yǎng)基 大腸埃希氏菌O157：H7 ATCC43888 |
制備好的平板可保存 2-5 天，應(yīng)避免光線直接照射。干燥培養(yǎng)基應(yīng)放置于陰暗干燥處， 保存溫度 2-8℃，注意避光保存。
失效
干燥培養(yǎng)基超過保質(zhì)期、結(jié)塊和顏色變化都不能使用。
注意
此培養(yǎng)基僅供實驗室使用。
參考文獻
1、Rappaport, F., and E. Henig. 1952. Media for the isolation and differentiation of pathogenic Escherichia coli (serotypes 0111 and 055). J. Clin. Pathol. 5:361-362.
2、 U.S. Food and Drug Administration. 1995. Bacteriological analytical manual, 8 th ed., AOAC International, Gaithersburg, MD.
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顯色平板菌落特征
O157顯色培養(yǎng)基的微生物靈敏度試驗:
按標簽用法制備培養(yǎng)基，接種以下質(zhì)控菌株，放置36±1℃需氧培養(yǎng)18-24小時。
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