化工儀器網
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 大鼠卵巢間質細胞 | 商品貨號 | A01X1625 |
組織來源 | 卵巢組織 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 |
種屬來源 | 大鼠 | 傳代特性 | 根據細胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 梭形細胞 ，不規則細胞 |
細胞簡介 |
卵巢不僅是卵子產生、生長并成熟的器官 ，也是腦垂體前葉分泌的靶 器官之一。其中 ，卵巢間質區是提供卵泡生長和發育的環境 ，卵巢間質主要由卵 巢間質細胞構成。探明卵巢間質細胞的增值及內分泌功能 ，在發情周期和妊娠期 發生變化的機理及調控因素 ，對進一步研究卵泡發育的調控、排卵、黃體形成和 退化、卵巢、卵巢間質細胞瘤發病機理 ，以及在這些生理和病理過程中參與 其中的激素及細胞因子作用機理均有重要意義。 |
包被條件：
培養基：原代間質細胞培養體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養條件：氣相：空氣 ，95%； CO2 ， 5%
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養液懸浮混勻，鋪于經離心形成連續梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養皿中，置于37℃、5％CO2培養箱內靜置培養24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養基，隨后隔天換液。
公司正在出售的產品：
小鼠脈絡膜成纖維細胞
豬膀胱上皮細胞
小鼠腎足細胞
兔腎小管上皮細胞
兔海綿體平滑肌細胞
小鼠肺微血管平滑肌細胞
小鼠毛囊角質細胞
兔腎小球內皮細胞
大鼠腦動脈平滑肌細胞
大鼠表皮干細胞
大鼠真皮毛乳頭細胞
人髓核細胞
人外根鞘細胞
大鼠原代腹腔主動脈平滑肌細胞
兔表皮干細胞
尖鐮孢黃瓜專化型（黃瓜枯萎病菌）Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum
辣椒疫霉Phytophthora capsici
茄鏈格孢（番茄早疫病菌）Alternaria solani
黑曲霉AspergillusnigervanTieghem
東方伊薩酵母Issatchenkiaorientalis
大腸埃希氏菌(大腸桿菌)Escherichiacoli
具核梭桿菌多形亞種Fusobacterium,nucleatum subsp. polymorphum
吸水鏈霉菌吸水亞種Streptomyceshygroscopicussubsp.hygroscopicus
橘橙指孢囊菌Dactylosporangiumaurantiacum
細黃鏈霉菌Streptomyces microflavus
大鼠卵巢間質細胞利迪鏈霉菌Streptomyceslydicus
LentzeaspLentzeasp
鏈霉菌Streptomycessp.
灰色鏈球菌Streptomycesgriseus
親和素鏈霉菌Streptomycesavidinii
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態呈梭形細胞 ，不規則細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化；
3)經1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
化工儀器網