核固紅染色液公司正在銷售的產品：豚鼠纖蛋白原(FG)試劑盒 Anti-PCSK1 Antibody粘附分子伴侶蛋白2抗體
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公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產品分類：結締染色

儲存條件：室溫,避光,12個月

用途：細胞核、網狀纖維染色,常用于復染

注意事項：主要由核固紅、去離子水組成。

 

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。

異黃芪皂苷II(標準品) Tianeptine sodium salt硫乙酰肝6腦苷脂轉硫1抗體包裝250mg

異黃芪皂苷IV(標準品) D-Glutamine 神經保護肽HN抗體包裝5g

異茴芹內酯(標準品) Zaltoprofen大鼠細小病H-1株(H-1)抗體（N端）包裝100g

異苦參 Sodium Glycocholate Hydrate透明質合成1抗體包裝25g

異類葉升麻苷；異毛蕊花糖苷（標準品） Mannitol；D-Mannitol缺氧誘導因子3α/HIF-3α抗體包裝1g

異蓮心堿（標準品） D-Cysteine hydrochloride monohydrate缺氧誘導因子脯酰4羥化抗體包裝5g

異綠原A(標準品) Calpain Inhibitor II(ALLM)透明質2/玻璃2抗體包裝100g

異綠原B(標準品) Ethisterone心臟鈣粘蛋白抗體包裝25g

異綠原C(標準品) Ethisterone17-β-羥脫氫6抗體包裝5g

異羅漢果皂苷 V D-CystineH5亞型全病抗體包裝1g

異芒果苷(標準品) DL-Tryptophan人類皰疹病8 ORF14抗體包裝250mg

異牡荊(標準品) DL-Serine透明質2/玻璃2抗體包裝25MG

異南五味子木脂寧 L-Methionine同源盒蛋白B2抗體包裝250mg

異歐前胡（標準品） DL-Phenylalanine同源盒蛋白B8抗體包裝5mg

異皮啶（標準品） DL-Asparagine monohydrate熱休克蛋白70家族蛋白6抗體包裝10mg

球孢白僵菌Beauveria│bassiana 質量規格：>98.0%,熔點18硫軟骨N-乙酰半乳糖基轉移1試劑盒苦杏仁苷;Amygdalin

43846=ATCC33205=IFO14230=JCM3312=KCCA-0312=NBRC14230資源名稱: 中間型高溫放線菌 質量規格：>98.5%,BR硫軟骨試劑盒假荊芥屬苷;Nepitrin

埃及曲霉Aspergillus│egyptiacus 質量規格：>99%,BR硫皮膚－硫軟骨PG試劑盒5-O-維阿斯米;5-O-Methy
核固紅染色液CD133 gen  造血干細胞抗原（多肽抗原）規格： 0.5mg

CD147/EMMPRIN(Extracellular matrix metalloproteinase inducer)  CD147(抗原)規格： 0.5mg

CD169/sialoadhesin(Sn)(Sialic acid-binding Ig-like lectin 1；Siglec-1)  CD169抗原規格： 0.5mg

CD272/BTLA(B and T lymphocyte attenuator)  B 和 T 淋巴細胞衰減蛋白(抗原)規格： 0.5mg

CDK2 (Cyclin-Dependent Kinase 2)  周期su依賴激mei2(抗原)規格： 0.5mg

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。

5）   之后更換正常培養基培養即可。