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人ELISA試劑盒實驗室基本操作
1 玻璃儀器的清
實驗中所用的玻璃儀器清潔與否，直接影響實驗的結(jié)果，往往由於儀器的不清潔或被污染而造成較大的實驗誤差，有時甚至?xí)?dǎo)致實驗的失敗。 做生物化學(xué)實驗對玻璃儀器清潔程度的要求，比一般化學(xué)實驗的要求更高。這是因為：①生物化學(xué)實驗中蛋白質(zhì)、酶、核酸等往往都是以“毫克”和“微克”計的，稍有雜質(zhì)，影響就很大。②生物化學(xué)實驗對許多常見的污染雜質(zhì)十分敏感，如金屬離子（鈣、鎂離子等）、去污劑和有機物殘基等，因此玻璃儀器（包括離心管等塑料器皿）是否*清洗凈就是非常重要的
⑴ 初用玻璃儀器的清洗
新購買的玻璃儀器表面常附著有游離的堿性物質(zhì)，可先用0.5％的去污劑洗刷，再用自來水洗凈，然后浸泡在1％～2％鹽酸溶液中過夜（不可少于四小時），再用自來水沖洗，后用無離子水沖洗兩次，在100℃～120℃烘箱內(nèi)烘干備用。
⑵ 使用過的玻璃儀器的清洗
先用自來水洗刷至無污物，再用合適的毛刷沾去污劑（粉）洗刷，或浸泡在0.5％的清洗劑中超聲清洗（比色皿決不可超聲），然后用自來水*洗凈去污劑，用無離子水洗兩次，烘干備用（計量儀器不可烘干）。清洗后器皿內(nèi)外不可掛有水珠，否則重洗，若重洗后仍掛有水珠，則需用洗液浸泡數(shù)小時后（或用去污粉擦洗），重新清洗
⑶ 石英和玻璃比色皿的清洗
決不可用強堿清洗，因為強堿會浸蝕拋光的比色皿。只能用洗液或1％ ～2％的去污劑浸泡，然后用自來水沖洗，這時使用一支綢布包裹的小棒或棉花球棒刷洗，效果會更好，清洗干凈的比色皿也應(yīng)內(nèi)外壁不掛水珠。
2. 塑料器皿的清洗
聚乙烯、聚丙烯等制成的塑料器皿，在生物化學(xué)實驗中已用的越來越多。次使用塑料器皿時，可先用8mol/L尿素（用濃鹽酸調(diào)pH = 1）清洗，接著依次用無離子水、1 mol/L KOH和無離子水清洗，然后用10—3 mol/L EDTA 除去金屬離子的污染，后用無離子水*清洗，以后每次使用時，可只用0.5％的去污劑清洗，然后用自來水和無離子水洗凈即可。
3. 洗液的配制
因己確定鉻有致癌作用，因此配制和使用洗液時要極為小心，常用兩種配制方法如下：
⑴ 取100mL 工業(yè)濃硫酸置于燒杯內(nèi)，小心加熱，然后慢慢加入5g重鉻酸鉀粉末，邊加邊攪拌，待全部溶解并緩慢冷卻后，貯存在磨口玻璃塞的細(xì)口瓶內(nèi)。
⑵ 稱取5g重鉻酸鉀粉末，置于250mL 燒杯中，加5mL 水使其溶解，然后慢慢加入100mL 濃硫酸，溶液溫度將達(dá)80℃，待其冷卻后貯存于磨口玻璃瓶內(nèi)
4. 其他洗滌
⑴ 工業(yè)濃鹽酸：可洗去水垢或某些無機鹽沉淀。
⑵ 5％草酸溶液：用數(shù)滴硫酸酸化，可洗去高錳酸鉀的痕跡。
⑶ 5％～10％磷酸三鈉（Na3PO4·12H2O）溶液：可洗滌油污物。
⑷ 30％硝酸溶液：洗滌二氧化碳測定儀及微量滴管
⑸ 5％～10％乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na2）溶液：加熱煮沸可洗脫玻璃儀器內(nèi)壁的白色沉淀物。
⑹ 尿素洗滌液：為蛋白質(zhì)的良好溶劑，適用于洗滌盛過蛋白質(zhì)制劑及血樣的容器。
⑺ 有機溶劑：如丙酮、乙醇等可用于洗脫油脂、脂溶性染料污痕等，二甲苯可洗脫油漆的污垢。
⑻ 氫氧化鉀的乙醇溶液和含有高錳酸鉀的氫氧化鈉溶液：這是兩種強堿性的洗滌液，對玻璃儀器的侵蝕性很強，可清除容器內(nèi)壁污垢，洗滌時間不宜過長，使用時應(yīng)小心慎重。
5. 玻璃和塑料器皿的干燥
生化實驗中用到的玻璃和塑料器皿經(jīng)常需要干燥，通常都是用烘箱或烘干機在110℃～120℃進(jìn)行干燥，而不要用丙酮蕩洗再吹干的方法來干燥，因為那樣會有殘留的有機物覆蓋在器皿的內(nèi)表面，從而干擾生物化學(xué)反應(yīng)。硝酸纖維素的塑料離心管加熱時會發(fā)生爆炸，所以決不能放在烘箱中干燥，只能用冷風(fēng)吹干。
6. 移液
準(zhǔn)確的分析方法對于生物化學(xué)實驗是極為重要的，在各種生物化學(xué)分析技術(shù)中，首先要熟練掌握的就是準(zhǔn)確的移液技術(shù)。為此要用到各種形式的移液管，其中有一些是學(xué)生們在化學(xué)實驗中未用過而在生化實驗中是常用的。下圖列出了一些生化實驗中常用的移液器具。
⑴ 滴管（圖1－1 中(E)）
使用方便，可用于半定量移液，其移液量為1mL—5mL，常用2mL，可換不同大小的滴頭（圖1－1 中(A)）。滴管有長、短兩種，新出一種帶刻度和緩沖泡的滴管，可以比普通滴管更準(zhǔn)確地移液，并防止液體吸入滴頭。
⑵ 移液管（吸管）
吸管使用前應(yīng)洗至內(nèi)壁不掛水珠，1mL 以上的吸管，用吸管刷刷洗，0.1mL、0.2mL和0.5mL 的吸管可用洗滌劑浸泡，必要時可以用超聲清洗器清洗。由于鉻酸洗液致癌，應(yīng)盡量避免使用。若有大量成批的吸管洗后沖洗，可使用沖洗桶，將吸管向上置于桶內(nèi)，用自來水多次沖洗后再用蒸餾水或無離子水沖洗。
吸管分為兩種，一種是無分度的，稱為胖肚吸管（圖1－1 中(F)），度較高，其相對誤差*為0.7％ ~ 0.8％，B級為1.5％ ~ 0.16％，液體自標(biāo)線流至口端（留有殘液），*等待15s，B級等待3s
另一種吸管為分度吸管（圖1－1 中(G)），管身為一粗細(xì)均勻的玻璃管，上面均勻刻有表示容積的分度線，其準(zhǔn)確度低于胖肚吸管，相對誤差*為0.8％ ~ 0.2％，B級為1.6％—0.4％，*、B級在吸管管身上有A、B字樣，有“快”字則為快流式，有“吹”字則為吹出式，無“吹”字的吸管不可將管尖的殘留液吹出。吸、放溶液前要用吸水紙擦拭管尖。
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