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人ELISA試劑盒試驗時可能遇到的問題

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人ELISA試劑盒試驗時可能遇到的問題:
1、過長(特別是室內溫度較高時)。
2、手工操作中,加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等待時間。
3、加完標本再加酶試劑時酶濺起孔外。.血清或血漿標本別離欠好即進行加樣。
 詳細留意事項:
1、血清標本如是以無菌操作別離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則主張冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下。
2、冰凍保存的血清標本須留意防止因停電等形成的重復凍融。標本的重復凍融所發生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發生損壞效果,然后引起假陰性成果。此外,凍融標本的混勻亦應留意,不要進行劇烈振動,重復倒置混勻即可。
3、標本在保存中如呈現細菌污染所造成的的混濁或絮狀物時,應離心沉積后取上清檢測。
4、要留意防止呈現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因而,在以HRP為符號酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相,然后與后邊參加的HRP底物反應顯色。
5、樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細菌污染,一則細菌的成長,其所排泄的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發生分化效果;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶自身會對用相應酶作符號的測定方法發生非特異性攪擾。
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