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大鼠ELISA試劑盒檢測程序
閱讀：95 發布時間：2017-11-1| 提 供 商 | 上海撫生實業有限公司 | 資料大小 | 13.9KB |
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大鼠ELISA試劑盒檢測程序
1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鐘。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
實驗方法與步驟
（1）環磷酰胺處理：取骨髓前24h先給小鼠腹腔注入環磷酰胺，注射劑量為100mg／kg動物體重。
（2）取骨髓：用損傷脊髓法處死小鼠，然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉，取出大腿骨，用一小塊紗布來回搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關節頭，然后用注射器吸取5ml生理鹽水，插入股骨一端，將骨髓細胞沖洗至10ml的離心管中。可重復沖洗多次，直至骨髓腔呈白色為止。
（3）離心處理：將所獲得的細胞懸浮液以 1000rpm離心10min，吸去上清液，在沉淀物中加入2滴滅活的小牛血清，制成細胞懸液。
（4）涂片：滴一滴懸液于載玻片一端，按常規方法涂片，在空氣中晾干。
（5）固定：將晾干的載玻片放入甲醇固定液中10min，取出晾干。
（6）染色：將制片平放在玻璃板上，用1∶9∶10的 Giemsa∶PBS∶瑞氏染液，染色15min，流水沖洗后晾干即可鏡檢。
（7）觀察：嗜多染紅細胞為年幼紅細胞，呈灰藍色，略大于紅細胞（紅色），微核多呈圓形和橢圓形，呈藍紫色或紫紅色（圖13-3）。
（8）結果分析：在顯微鏡下，每只小鼠骨髓涂片標本計數1000~2000個嗜多染紅細胞，包括其中出現微核的細胞數，將結果填入表內，并計算微核細胞率，觀察記錄結果（表13-2）。
按100mg/kg體重劑量給小鼠腹腔注射環磷酰胺，其嗜多染紅細胞微核率為（48.9±3.6）％。正常小鼠嗜多染紅細胞微核率為5‰以下，超過5‰為異常。
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