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蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)ELISA試劑盒使用說明書
閱讀:180 發(fā)布時間:2016-12-26提 供 商 | 上海撫生實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 3.1KB |
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蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)ELISA試劑盒操作步驟:
編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)ELISA試劑盒結(jié)果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為兔蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)陰性
陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為兔蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)陽性
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