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多克隆抗體和單克隆抗體有缺點
閱讀:2137 發布時間:2018-8-2多克隆抗體能識別任一抗原上的多個表位,而單克隆抗體僅檢測任一抗原上的一個表位。但是它們兩者有著屬于各自的優點和缺點。今天上海恒遠生物要給朋友們說的重點正是它們的優缺點,來比比看誰厲害吧。
【多克隆抗體】
優點展示:
1. 克隆抗體可有助于放大低表達水平的靶蛋白信號,因為靶蛋白可在多個表位上結合不止一個抗體分子。但是這會給定量實驗造成不利影響,因為結果將變得不準確。
2. 由于能識別多個表位,多克隆抗體可在IP/ChIP中得到更好的結果。
3. 比單克隆抗體更能容許抗原中的微小變化。
4. 它們會識別出與免疫原蛋白質具有高同源性的蛋白質,或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白,例如當未測試物種中的抗原性質未知時,有時會使用多克隆抗體。這也使得檢測免疫原序列以確定是否有任何交叉反應性非常重要。
5. 多克隆抗體通常是檢測變性蛋白質的。
6. 多表位通常可提供更為有力的檢測。
7. 多克隆抗體不適用于探測抗原的特定結構域,因為抗血清通常可識別多個結構域。
不足之處:
·易于產生批次間差異。
·產生大量非特異性抗體,有時可能在某些應用中產生背景信號。
·多表位使得檢測免疫原序列以確定是否有任何交叉反應性非常重要。
客觀事實:
1. 識別任一抗原上的多個表位。獲得的血清將包含不同親和力抗體的異質復合體混合物。
2. 多克隆抗體主要由 IgG 亞類組成。
3. 肽免疫原通常用于產生靶向表位的多克隆抗體,特別適合高同源性的蛋白家族。
抗體制備:
1. 制備成本低廉。
2. 制備所需技術和技能不高。
3. 制備時間短。
4. 多克隆抗體不適用于探測抗原的特定結構域,因為多克隆抗血清通常可識別多個結構域。
【單克隆抗體】
優點展示:
1. 雜交瘤制得后,就成為了恒定的再生源,所有批次都將相同–對確保實驗步驟和結果的一致性和標準化非常有幫助。
2. 單克隆抗體通常在切片和細胞染色造成的背景較低。因為它們以更強特異性檢測一個靶表位,所以不太可能與其它蛋白質發生交叉反應。
3. 由于具有特異性,單克隆抗體非常適于用作分析測定中的一抗,或者用于檢測組織中的抗原,并且通常所產生的背景染色顯著低于多克隆抗體。
4. 與多克隆抗體相比,單克隆抗體的同質性非常高。如果實驗條件保持不變,單克隆抗體的各實驗結果重現性很高。
5. 單克隆抗體的特異性能使其在混合物中和抗原地結合。
不足之處:
·可產生大量特異性抗體,但是可能特異性過強。
·經過抗原的化學處理后比多克隆抗體更易于丟失表位。這可通過使用同一抗原的兩個或多個單克隆抗體進行補償。
客觀事實:
1. 僅檢測抗原上的一個表位。
2. 它們僅由一個抗體亞型組成。在需要二抗進行檢測時,應針對正確的亞類選擇抗體。
抗體制備:
1. 需要高技術。
2. 需要先培訓才能使用技術。
3. 制備雜交瘤耗時長。