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技術(shù)文章

ELISA試劑盒凱氏定氮法測(cè)定化合物總氮量的注意之處

閱讀:1140          發(fā)布時(shí)間:2017-2-13

人ELISA試劑盒凱氏定氮法的注意十處:
1.樣品放入定氮瓶?jī)?nèi)時(shí),不要沾附頸上。萬(wàn)一沾附可用少量水沖下,以免被檢樣消化不*,結(jié)果偏低。
2.如硫酸缺少,過(guò)多的硫酸鉀會(huì)引起氨的損失,這樣會(huì)形成硫酸氫鉀,而不與氨作用。因此,當(dāng)硫酸過(guò)多的被消耗或樣品中脂肪含量過(guò)高時(shí),要增加硫酸的量。(3) 硝化時(shí)如不容易呈透明溶液,可將定氮瓶放冷后,慢慢加入30%過(guò)氧化氫(H2O2)2-3ml,促使氧化。
3.在整個(gè)消化過(guò)程中,不要用強(qiáng)火。保持和緩的沸騰,使火力集中在凱氏瓶底部,以免附在壁上的蛋白質(zhì)在無(wú)硫酸存在的情況下,使氮有損失。
4.氨是否*蒸餾出來(lái),可用PH試紙?jiān)囸s出液是否為堿性。
5.吸收液也可以用0.01當(dāng)量的酸代表硼酸,過(guò)剩的酸液用0.01N堿液滴定,計(jì)算時(shí),A為試劑空白消耗堿液數(shù),B為樣品消耗堿液數(shù),N為堿液濃度,其余均相同。
6.向蒸餾瓶中加入濃堿時(shí),往往出現(xiàn)褐色沉淀物,這是由于分解促進(jìn)堿與加入的硫酸銅反應(yīng),生成氫氧化銅,經(jīng)加熱后又分解生成氧化銅的沉淀。有時(shí)銅離子與氨作用生成深l藍(lán)色的結(jié)物[Cu(NH3)4]2+
7.這種測(cè)算方法本質(zhì)是測(cè)出氮的含量,再作蛋白質(zhì)含量的估算。只有在被測(cè)物的組成是蛋白質(zhì)時(shí)才能用此方法來(lái)估算蛋白質(zhì)含量。    
8.加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點(diǎn),硫酸銅為催化劑,硫酸銅在蒸餾時(shí)作堿性反應(yīng)的指示劑。
9.混合指示劑在堿性溶液中呈綠色,在中性溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈紅色。如果沒(méi)有溴甲酚綠,可單獨(dú)使用0.1%甲基紅乙醇溶液。
10.以硼酸為氨的吸收液,可省去標(biāo)定堿液的操作,且硼酸的體積要求并不嚴(yán)格,亦可免去用移液管,操作比較簡(jiǎn)便。

人ELISA試劑盒凱氏定氮法是測(cè)定化合物或混合物中總氮量的一種方法。
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