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大鼠核因子κB(NF-κB)ELISA試劑盒

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更新時(shí)間:2016-06-22 15:16:31瀏覽次數(shù):472次

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產(chǎn)品名稱(chēng):大鼠核因子κB(NF-κB)ELISA試劑盒

 英文名稱(chēng):Rat Nuclear factor-kappa B,NF-κB ELISAKit

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
       ①直接法    該方法直接利用抗原 與酶聯(lián)抗體的結(jié)合,較簡(jiǎn)單易行。A.假抗原。在聚苯乙烯酶標(biāo)版的孔穴中加入待檢測(cè)的抗原(捕食者胃內(nèi)含物抽提液)0.2mL,在4℃冰箱中過(guò)夜,使抗原黏附于塑料孔壁上。B.洗滌兩次,倒置于干毛巾上,使孔穴中的液體盡量流出。c.加酶聯(lián)抗體。 各孔穴中加入酶聯(lián)抗體0.2mL,在mL37℃下孵育3h,使其充分結(jié)合。d. 加底物。 用PBS充分洗滌以除去未結(jié)合的酶聯(lián)抗體,然后加入底物(鄰苯二胺)0.2 mL,于37℃反應(yīng)30min,用2mol/L硫酸0.05 mL終止反應(yīng)。e. 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定其吸光度值,分別設(shè)陽(yáng)性、陰性和空白對(duì)照,以確定陽(yáng)性反應(yīng)臨界值。
        ②雙抗體夾心法   該方法與直接法的不同在于吸附抗體。a. 包被抗體。酶標(biāo)板的孔穴中加入0.2 mL抗體(用PH=9.6/0.05mol/L碳酸鹽緩沖液稀釋?zhuān)?7℃水浴中孵育3h,移入4℃冰箱過(guò)夜。將各孔中多余的抗體傾去,加入PBS洗滌,立即甩去,再將PBS加滿(mǎn)各板孔,置5min,甩去溶液,如此洗滌2次,倒置于干毛巾上,使孔穴中的液體盡量流出。b. 加待檢抗原。沒(méi)孔中加入待檢捕食者胃內(nèi)含物抽提液0.2 mL.同時(shí)設(shè)陽(yáng)性、陰性和空白(PBS)對(duì)照,37℃水溶中孵育3h,轉(zhuǎn)入冰箱中過(guò)夜。如上法洗滌3次。C. 加入酶聯(lián)抗體。每孔加入酶聯(lián)抗體0.2 mL,37℃水浴孵育2h,如上法洗滌3次。d. 加底物。 每孔加入底物鄰苯二胺0.2 mL, 37℃水浴孵育1h,加入2mol/L硫酸0.05,以終止反應(yīng)。e. 用 ELISA檢測(cè)儀測(cè)定其吸光度值。
       ③間接法  與前兩種方法不同點(diǎn)在于酶聯(lián)抗體與抗原的間接結(jié)合。a. 每孔加入待檢抗原0.2 mL ,4℃冰箱中過(guò)夜,使抗原黏附于塑料孔壁上。并依上法洗滌3次。b. 每孔加0.2 mL,用PBS稀釋的抗體,37℃孵育2-3h。c.用PBS洗滌3次后,加入溶于PBS的酶聯(lián)抗體0.2mL,37℃孵育2-3h。d. 加底物,方法同上。e. 用ELISA檢測(cè).
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