1、原理及適用范圍
腸出血性大腸桿菌O157:H7是一種新出現的食物傳播性疾病的病因。它除了引起腹瀉、出血性腸炎外,還可發生溶血性尿毒綜合癥、血栓性血小板減少性紫癜等嚴重的并發癥。自1982年美國發現因該致病菌引起的食物中毒以來,腸出血性大腸桿菌O157:H7疫情開始逐漸擴散和蔓延,相繼在英國、加拿大、日本等多個國家引起腹瀉爆發和流行。我國已陸續有十余個省份在市售食品、進口食品、腹瀉病患者、家畜家禽等分離到大腸桿菌O157:H7。大腸桿菌O157測試片(FilmplateTM E.coli O157BO204)采用進口高選擇性顯色培養基作為主要原料,運用微生物測試片專有技術,做成一次性快速檢驗產品,一步培養15~24h就可確認,大大地簡化了檢測程序,非常適合各級檢驗部門和食品企業使用。本品適用于海產品、水產品、各類熟肉制品和冷葷、蛋及蛋制品等的快速檢測。參照標準:食品衛生微生物學檢驗大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢驗(GB/T4789.36-2008)。
2、操作方法
2.1、樣品處理:取樣品25mL(g)放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液(或生理鹽水)的取樣罐或均質杯內,制成1:10的樣品勻液。
2.2、接種:將大腸桿菌O157測試片置于平坦實驗臺面,揭開上層膜,用無菌吸管吸取1mL樣品勻液緩慢均勻地滴加到紙片上,然后再將上層膜緩慢蓋下,靜置10s左右使培養基凝固,zui后用手輕輕地壓一下,每個稀釋度接種兩片,同時做一片空白陰性對照。
2.3、培養:將測試片疊在一起放回原自封袋中,并封口,透明面朝上水平置于恒溫培養箱內,堆疊片數不超過12片。培養溫度為36℃±1℃,培養15~24h。
3、結果判讀
對測試片進行觀察,呈紫紅色的菌落為大腸桿菌O157;呈藍色的菌落為其他大腸菌群。出現陽性菌落的樣本,用其他更為可靠的方法進行驗證,沒有條件的至少要再取樣重復檢驗一次。
4、報告方式
報告每25g(或25ml)樣品中檢出或未檢出大腸桿菌O157。
5、附加說明
5.1、本品所用培養基已在國外得到比較廣泛的應用,有關驗證試驗表明,接純菌種可以產生典型的紫紅色菌斑,準確率達到98%(K.A. Betheim. 1998. J. Clin. Microbiol.85:425-428)。
5.2、經本公司檢測,大腸桿菌O157測試片對純菌的檢測靈敏度為1CFU/mL。
5.3、注意使用過的測試片上帶有活菌,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。
6、保存條件
本產品需存放在4℃~10℃冰箱中,保質期為一年,鋁箔袋打開后,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好,放到冰箱中,一個月內用完。在高濕度的環境中可能出現冷凝水,在拆封前將整包回溫至室溫。
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