多功能酶標儀的應用介紹及選型攻略指南

酶標儀也被稱為微孔板檢測儀，
是生命科學研究實驗室的重要工具。
傳統的酶標儀是指具備吸收光檢測功能的酶聯免疫檢測儀，后來隨著檢測方式的發展，在吸收光檢測基礎上增加了熒光和發光檢測，因此，我們把具有兩種及兩種以上檢測功能的酶標儀稱為多功能酶標儀，也叫做多功能微孔板檢測儀，目前廣泛應用于臨床檢驗、生物學研究、農業科學、食品和環境科學研究中。

今天小編就以十年技術支持的經驗來簡單粗暴地談一談多功能酶標儀以及它能實現的功能，希望能為研究者在選擇酶標儀的時候提供一定的參考。
 

多功能酶標儀的應用

多功能酶標儀通常包括紫外-可見吸收光、熒光強度及發光三種檢測模式，熒光檢測還包括高級熒光應用。因此一臺全面的多功能酶標儀能夠提供的檢測模式可以包括：

1、吸收光檢測（Absorbance）：
使用單色器或者濾光片系統來發射和檢測特定波長，檢測的是物質本身，不同的物質有不同的吸收光波長，對波長選擇靈活性要求較高。
典型應用：ELISA 以及 DNA/RNA 純度檢測

2、熒光強度（Fluorescence Intensity，FI）：
采用特定波長激發光來激發樣品孔內的熒光標志物，通過檢測器檢測熒光物質被激發產生的發生光。因為熒光分子被激發后電子會發生能量躍遷，當電子回落時產生發射光，因此發射光的波長會比激發光的波長更長（能量更低），比如常用的 GFP 的最佳激發波長是 488nm ，最佳發射光檢測波長是 510nm 。

熒光強度還有一個衍生實驗，那就是熒光共振能量轉移（Fluorescence Resonance Energy Transfer，FRET），使用兩種熒光分子分別作為供體和受體去標記兩個生物分子，如果兩個生物分子足夠接近，那么供體熒光分子的激發能誘發受體熒光分子發出熒光信號。FRET 通常用來檢測生物大分子相互作用。值得注意的是，選用的供體熒光分子發射光波長范圍需要與受體熒光分子的激發光波長重疊。

3、發光檢測（Luminescence）：
包括化學發光和生物發光，是樣本孔內發生的化學、生化或者酶反應發出的光信號。與吸收光和熒光檢測不同的是，發光檢測不需要激發光源，這就使得發光更敏感，更不容易引起背景噪音。
典型應用：ATP 檢測和雙報告基因檢測

4、發光共振能量轉移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）：跟 FRET 類似的檢測原理，不同的是供體產生生物發光來激發受體熒光分子，可以用來進行細胞內的分子互作分析。

5、時間分辨熒光（Time-resolved fluorescence ，TRF）：
是一種高級熒光檢測，使用鑭系金屬（常用稀土元素：銪 Eu 和鋱 Tb）做熒光標記，這種稀土元素的特點是：被激發后熒光壽命很長，不會馬上猝滅。利用這種特性，就可以在激發后延遲檢測，使得檢測信號不受激發光和背景熒光的干擾，是一種極其敏感的檢測方法。
這種方法常常與能量共振轉移（FRET）聯合使用，也就是大家熟知的 HTRF 技術（勻相時間分辨熒光），用于大分子相互作用檢測，靈敏度高、特異性好。