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方法:
1、將DNA加熱(至90~95℃)變性,bai 將雙股的DNA加熱后轉為單股DNA以做為復制的模板。
2、則是令 Primers于一定的溫度下(冷卻至55~60℃)附著于模板DNA兩端。 后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下(加熱至70~75℃)進行引物的延長 Extension of primers及另一股的合成。
標準PCR儀也叫做終點PCR儀,是指目的基因僅經過預變性、變性、退火、延伸階段產生大量的核酸序列的PCR儀,PE-Cetus公司推出的一臺PCR自動化熱循環儀屬于此種。
根據PCR退火溫度和擴增條件(細胞內/外),標準PCR又可以分為三類:普通PCR、梯度PCR和原位PCR。
PCR是分子生物學研究極其重要的工具,是一種用于放大擴增特定的DNA段的分子生物學技術,基本原理是在試管中模擬細胞內的DNA復制,即人為創造核酸半保留復制條件,使目的DNA在細胞外完成擴增的過程,它可被看作是生物體外的特殊DNA復制。
擴展資料
1、普通PCR儀:一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的、對單一退火溫度的目的基因的擴增。主要應用于科研、教學、臨床醫學、檢驗、檢疫等。
2、梯度PCR儀:普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴增儀。梯度PCR儀每個孔的溫度可以在范圍內按照梯度設置,一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)。由于被擴增的DNA段不同,其退火溫度也不同,通過梯度設置。
可一次性篩選出的退火溫度。這樣既可節省試驗時間,提高實驗效率,又能節約實驗成本。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。梯度PCR儀多應用于科研、教學機構。
3、原位PCR儀:是將PCR技術的高效擴增與原位雜交的細胞定位結合起來,用于從細胞內靶DNA的定位分析的細胞內基因擴增儀,從而在組織細胞原位檢測單拷貝或低拷貝的特定DNA或RNA序列。原位PCR技術的待檢標本一般先經化學固定,以保持組織細胞的良好形態結構。
細胞膜和核膜均具有一定的通透性,當進行PCR擴增時,各種成分,如引物、DNA聚合酶、核苷酸等均可進進細胞內或細胞核內,以固定在細胞內或細胞核內的RNA或DNA為模板,于原位進行擴增。
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