蛋白質 Pierce 660 法分析采用專有蛋白結合材料作為比色法檢測試劑來確定未純化蛋白質樣品的總蛋白濃度。此應用適用于含有高濃度洗滌劑、還原劑和其他常用試劑的蛋白質溶液。 Pierce 660 法應用檢測 660 nm 處的吸光度,使用標準曲線來計算蛋白質濃度 (有關詳細信息,請參閱使用標準曲線)。可應用一個單點基線矯正。
蛋白質 Pierce 660 法分析理論
蛋白質 Pierce 660 法分析基于專有的染料金屬絡合物與蛋白在酸性條件下結合,在660 nm 處檢測使染料的吸收轉移。染料金屬絡合物是紅棕色,在蛋白結合后變綠色。顏色更改是由于在低 pH 值通過與蛋白質中帶正電荷氨基酸基團相互作用通過質子化產生的。染料主要與蛋白中堿性殘基相互作用,如組氨酸、精氨酸和賴氨酸,以及在較小程度上的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。反應產物在 660 nm 處檢測和使用 750 nm 處的吸光度值進行基線矯正。
在分析中產生的顏色是穩(wěn)定的,并在廣泛的范圍內隨增加的蛋白質濃度的比例增 加。可選的離子洗滌劑相容試劑 (IDCR) 可添加到檢測試劑中以提高與大量離子洗滌劑的兼容性,包括 Laemmli SDS 樣品緩沖液與溴酚藍。 IDCR 在*混合后會全部溶解,對檢測無影響。我們或本地經銷商均有提供預先配制的蛋白結合材料試劑盒。有關 IDCR 的信息,請咨詢試劑盒制造商。
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