詳細介紹
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中猴雌二醇(E2)的含量。
l 有效期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被猴雌二醇(E2)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的猴雌二醇(E2)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
實驗標本采集必修課:
1)標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
2)血清:使用不含熱原的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
3)血漿:3000轉離心30分鐘取上清。
4)細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
5)組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,3000轉離心10分鐘取上清。
6)保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
常見問題解析:
1.加樣量不*?
解決方法:樣品稀釋前應充分混勻,盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴。
2.樣品數量多少不一,加樣時間有長有短?
解決方法:重復某一樣品時,加樣時間盡可能與*次接近。
3.保溫時間不*,洗滌條件不*,操作人員不*?
解決方法:重復測定標本,操作條件、人員等應盡可能與上次保持*,以排除這些因素造成的不*的可能性。
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:①標本因素;②試劑因素;③操作因素。
應用領域:
1、免疫酶染色各種細胞內成份的定位。
2、研究抗酶抗體的合成。
3、顯現微量的免疫沉淀反應。
4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。
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