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恒遠生物|細胞培養(yǎng)需知
閱讀:417 發(fā)布時間:2023-11-7隨著時代的發(fā)展,現(xiàn)如今的生命科學(xué)事業(yè)也在蓬勃發(fā)展,國內(nèi)越來越多的實驗室開始做起了細胞培養(yǎng)的相關(guān)實驗,如果你打算或者是正在做細胞培養(yǎng)的實驗?zāi)敲匆韵碌膬?nèi)容會對你的實驗有所幫助。
1、選擇正確的培養(yǎng)基
在養(yǎng)細胞之前,就要了解,你所養(yǎng)細胞的來源以及種類和名稱,查閱一定量的文獻,確定所需培養(yǎng)液種類以及是否需要添加特殊成分,常用的細胞培養(yǎng)液有DMEM、RPMI1640、F12等等,一些常見的細胞基本可以使用這幾種培養(yǎng)基中的一種來培養(yǎng),有的需要加入一定其他成分,這需要根據(jù)不同的細胞類型,查ATCC細胞庫或者查文獻,才能找到所需要的培養(yǎng)液。(選擇正確的培養(yǎng)液是養(yǎng)好細胞的第1步)
2、了解細胞的生長習(xí)性
不同的細胞生長習(xí)性不同,如成纖維細胞是貼壁生長,有一定的密度依賴性,密度小可能會出現(xiàn)不增殖,狀態(tài)差的情況,接種密度大時則需要隔天傳代,頻繁傳代則影響細胞狀態(tài);再如RPMI-8226人多發(fā)性骨髓瘤細胞,是懸浮生長的,傳代需離心棄去上清即可。總之,了解細胞生長習(xí)性,再加上正確的計數(shù),才能掌握好傳代的密度。
3、選擇優(yōu)質(zhì)的血清
血清中含有細胞生長所必須的生長因子,作為哺乳動物細胞培養(yǎng)的附加物,血清的添加是十分重要的,因此,選擇優(yōu)質(zhì)的血清,是細胞養(yǎng)殖成功與否的關(guān)鍵!
4、及時傳代和更換培養(yǎng)液
在細胞增殖到一定的密度后要及時傳代,根據(jù)細胞的生長速度和密度,及時更換培養(yǎng)液。更換過勤,浪費培養(yǎng)液,若不夠及時,則細胞狀態(tài)轉(zhuǎn)差,一般需隔天更換培養(yǎng)液,具體可根據(jù)所養(yǎng)細胞種類予以調(diào)整。
5、絕對的無菌意識
如果無菌意識差,當(dāng)細胞中混入了微生物,將會導(dǎo)致實驗功虧一簣,細菌的生長速度和破壞力,將迅速占領(lǐng)培養(yǎng)皿,破壞細胞結(jié)構(gòu),有些初學(xué)者會在培養(yǎng)液中加入1%的雙抗,但無菌意識不強,雙抗亦無法拯救你的細胞!所以在培養(yǎng)細胞的過程中需要有這絕對的無菌意識才可保障細胞培養(yǎng)完好。
6、傾心的呵護,頻繁的觀察
做到以上幾點,就可以開始養(yǎng)你的細胞了,但需要再次和大家強調(diào)的是細胞嬌弱,在養(yǎng)細胞的過程中,難免會出現(xiàn)一些問題,要想成功培養(yǎng)好細胞,應(yīng)時時注意并且不斷地對細胞進行觀察,初期一天可以觀察個兩次以上,出現(xiàn)任何預(yù)料外的情況應(yīng)及時處理,才能保障后期收獲一盤“漂亮"的細胞。
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